Quantitation of Ethyl Glucuronide and Ethyl Sulfate in Urine using LC-MS/MS

Význam tématu

Error! Nealkoholické biomarkery ethyl glukuronid (EtG) a ethyl sulfát (EtS) představují spolehlivé ukazatele konzumace alkoholu v probíhajících léčebných programech a monitoringu abstinence. Kvantifikace těchto metabolitů v moči umožňuje nejen potvrdit nedávné požití etanolu, ale i stanovit míru expozice alkoholu s vyšší citlivostí a specifičností než konvenční metody.

Cíle a přehled studie

Studie si kladla za cíl vyvinout krátkou a robustní kvantitativní metodu pro současné stanovení EtG a EtS v lidské moči a syntetické moči (surine) s využitím vysokotlaké kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC–MS/MS). Metoda byla validována na sedmi koncentracích kalibrátorů a čtyřech kvalitativních kontrolních vzorcích (QC) v obou matrix.

Použitá metodika a instrumentace

Byla využita ultra UHPLC Nexera spojená s triple kvadrupolárním hmotnostním spektrometrem Shimadzu LCMS-8045. Jako chromatografická kolona sloužil Raptor EtG/EtS (100×2,1 mm, 2,7 µm) s předkolonkovým filtrem 0,2 µm. Mobilní fáze byla lineárně gradována mezi 0,1 % kyselinou mravenčí ve vodě a v acetonitrilu. Ionizace probíhala v negativním režimu (ESI–) a sledovány byly vybrané přechody MRM. Interními standardy byly deuterované EtG-d5 a EtS-d5.

Hlavní výsledky a diskuse

• EtG a EtS elutovaly při 0,81 min a 1,87 min, dostatečně oddělené od matricových interferencí.
• Lineární kalibrace v rozsahu 50–5000 ng/mL dosáhly koeficientů determinace R2>0,998.
• Přesnost QC vzorků se pohybovala mezi 88 % až 114 % v moči a 88 % až 102 % v surine.
• Metoda prokázala nízké chromatografické rušení v matrix a reprodukovatelné výsledky u referenčních standardů UTAK a pozitivních vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda umožňuje rychlé (méně než 4 min) a přesné stanovení EtG a EtS při nízkých koncentracích. Díky vysoké selektivitě a reprodukovatelnosti je vhodná pro klinické laboratoře, protialkoholní programy, forenzní a pracovní toxikologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření LC-MS/MS technik v bodových testech a automatizaci přípravy vzorků. Využití mikrofluidních čipů a pokročilých ionizačních režimů by mohlo dále zkrátit dobu analýzy a minimalizovat objem spotřebního materiálu.

Závěr

Vyvinutá LC–MS/MS metoda na přístroji LCMS-8045 nabízí rychlou, robustní a validovanou analýzu EtG a EtS v moči. Dosahuje vynikajících parametrů lineárnosti, přesnosti i specificity v rámci nulové tolerance alkoholu.

Reference

• Žádné literární odkazy uplatněné v původním textu