An Improved Global Method for the Quantitation and Characterization of Lipids by High Performance Liquid Chromatography and Corona Charged Aerosol Detection

Význam tématu

Lipidy představují klíčovou skupinu biomolekul se širokým spektrem funkcí od stavebních bloků buněčných membrán po energetické zásoby a průmyslové aplikace. Jejich přesná charakterizace a kvantifikace je zásadní pro biochemii, potravinářství, kosmetiku i farmaceutický výzkum. Moderní chromatografické techniky s univerzální detekcí umožňují komplexní analýzu různých tříd lipidů bez nutnosti derivatizace.

Cíle a přehled studie / článku

Autoři navrhli a ověřili vylepšenou globální metodu založenou na vysokotlaké kapalinové chromatografii v kombinaci s detekcí nabitých aerosolových částic. Cílem bylo dosáhnout vysokého rozlišení a citlivosti pro pět hlavních tříd lipidů včetně parafinů, mastných kyselin, alkoholů, esterů a acylglycerolů. Metoda byla demonstrována na standardech i složitých vzorcích algálního a pštrosího oleje.

Použitá metodika

Pro separaci lipofilních látek autoři zvolili akcelerovaný gradient tří mobilních fází na solid core koloně C18. Vzorky standardů a reálných olejů se připravily jednoduchou ředicí procedurou v metanol chloroform nebo metanol tetrahydrofuran v poměru 1:1 a po odstředění byly analyzovány. Gradient se pohyboval od vysokého podílu metanolu k acetonu a THF pro optimální rozdělení širokého rozpětí polarit.

Použitá instrumentace

• HPLC systém s quaternárním čerpadlem a autosamplerem
• Termostatovaná kolona Accucore C18 2.6 μm, 3.0 × 150 mm při 40 °C
• Detektor nabitých aerosolových částic Corona ultra RS s teplotou trysky 15 °C a filtrem 3 μm
• Software pro sběr a vyhodnocení dat Chromeleon 7.1

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala schopnost detekovat lipidy na úrovni jednotek až desítek ng na koloně, s liniovitými až kvadratickými kalibracemi v rozsahu čtyř dekád. U standardů parafinů, mastných kyselin, alkoholů, esterů a acylglycerolů byla dosažena korelace r2 vyšší než 0.996. Vzorky algálního oleje demonstrovaly vysoké rozlišení složitých profilů, pštrosí olej pak splnil specifikace distribučních poměrů triacylglycerolů ve shodě s normami AEA. Použití power funkce umožnilo lineární přístup i u nelineárních odezev.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda nabízí univerzální a rychlý nástroj pro simultánní analýzu různých lipidových tříd bez derivatizace. Díky vysoké citlivosti a širokému dynamickému rozsahu je vhodná pro rutinní laboratoře i výzkumné projekty v oblasti QA/QC, potravinářství a biotechnologií. Minimalizuje nároky na přípravu vzorku a umožňuje přímé srovnání s hmotnostní spektrometrií.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další integrace s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci neznámých lipidů, vývoj nových stacionárních fází pro lepší separaci izomerů a automatizaci přípravy vzorků v monolitických a mikrofluidních systémech. Pokročilé datové analýzy a strojové učení podpoří interpretaci komplexních lipidomických dat.

Závěr

Představená metoda HPLC Corona CAD představuje univerzální platformu pro kvalifikativní i kvantitativní analýzu širokého spektra lipidů. Výjimečné rozlišení, citlivost a robustnost podtrhují její přínos pro průmyslovou a akademickou praxi. Úspěšné aplikace na algálním a pštrosím oleji potvrzují široké možnosti využití.

Reference

• Plante M., Bailey B., Acworth I. N. An Improved Global Method for the Quantitation and Characterization of Lipids by High Performance Liquid Chromatography and Corona Charged Aerosol Detection. Thermo Fisher Scientific, 2013
• American Emu Association. Specifications of triacylglycerol content of emu oil by AOCS HPLC method Ce5b-89. Emushop.com. Accessed February 2013