Analysis of Phospholipids in Natural Samples by Normal Phase HPLC and Corona Charged Aerosol Detection

Význam tématu

Phospholipidy představují klíčové komponenty biologických membrán a výživových přípravků. Jejich přesná kvantifikace v potravinách, doplňcích stravy či přírodních extraktech je zásadní pro kontrolu kvality, potvrzení nutriční hodnoty a průmyslové využití.

Cíle a přehled studie / článku

Autoři vyvinuli a validovali normal-phase HPLC metodu s Corona Charged Aerosol Detector (CAD) ke stanovení šesti hlavních glycerofosfolipidů (PC, PE, PS, PI, LPC) v potravinových vzorcích a surovinách. Metoda navazuje na původní práci Rombauta et al. (2005) a je optimalizována pro běžné systémy včetně gradientního eluačního profilu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla použitá chromatografická sestava Thermo Scientific Dionex UltiMate LC s LPG3400-SD pumpou, WPS3000 RS autosamplerem a TCC3000 RS termostatovanou kolonou. Kolonou byla Hypersil GOLD Silica (3 µm, 3×150 mm) při 50 °C. Mobilní fáze: A – 0,5 % diethylamin-formiát (pH 3,0), B – 2-propanol, C – iso-oktan; gradientní profil s průtokem 0,2–0,8 mL/min. Detekce probíhala Corona Veo SD CADem (evaporátor 50 °C, datový rate 10 Hz, čas filtru 3,6 s, PowerFunction 1,40). Příprava standardů zahrnovala 78–10 000 ng na kolonu, vzorky: vejce, lecitin, krillový olej – extrakce a ředění methanol/chloroform (1:1), filtrace.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOD 10–22 ng na kolonu a LOQ 31–67 ng. Linearita kalibrací pro PC, PE, PS, PI a LPC vykázala R2 > 0,995 v rozsahu 78–10 000 ng. Analýza vaječného žloutku prokázala shodu složení s literaturou (EL Bagir et al. 2006) s odchylkou <10 %. Lecitin ukázal typické zastoupení PE, PI, PS a PC, LPC však maskoval matriční signál. Krillový olej vykázal převahu PC, PE a LPC a porovnatelnou hodnotu celkových fosfolipidů vůči AOCS metodě (odchylka <15 %). Čistota chromatogramů a reprodukovatelnost zaručují spolehlivou identifikaci i v náročných matricích.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost bez nutnosti derivatizace nebo chromoforu.
• Široký dynamický rozsah a silná linearita.
• Kompatibilita s gradientními metodami a automatizovanou přípravou vzorků.
• Uplatnění v potravinářské, farmaceutické a kosmetické kvalitě, R&D i QA/QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Propojení s hromadnou spektrometrií pro strukturální analýzu lipidů.
• Automatizace extrakce a přípravy vzorků pro vyšší průchodnost.
• Rozšíření aplikačního portfolia na sphingolipidy, glykolipidy či ceramidy.
• Využití v nutrigenomice, metabolomice a environmentálních studiích.

Závěr

Normal-phase HPLC ve spojení s Corona Charged Aerosol Detektorem nabízí citlivou, reprodukovatelnou a univerzální metodu pro kvantifikaci nechromoforických fosfolipidů v přírodních vzorcích. Výsledky potvrzují vysokou přesnost i přenositelnost do rutiní praxe.

Reference

1. El Bagir NM; et al. Lipid Composition of Egg Yolk and Serum in Laying Hens Fed Diets Containing Black Cumin (Nigella sativa). Int J Poult Sci. 2006;5(6):574–578.
2. Walker LA; Wang T; Xin H; Dokle D. Supplementation of Laying-Hen Feed with Palm Tocos and Algae Astaxanthin for Egg Yolk Nutrient Enrichment. J Agric Food Chem. 2012;60:1989–1999.
3. AOCS Official Method Ja 7c-073. Thermo Fisher Scientific, 2014.