Plasma Free Metanephrines Quantitation with Automated Online Sample Preparation and Liquid Chromatography—Tandem Mass Spectrometry

Význam tématu

Plazmatické volné metanephriny, metanephrin (MN) a normetanephrin (NMN), jsou klíčovými biomarkery pro diagnostiku feochromocytomu. Precizní a rychlé stanovení jejich koncentrací v biologických vzorcích je nezbytné pro klinický výzkum i preklinickou praxi. Kombinace automatizované online přípravy vzorku a vysokoadva­nované hmotnostní spektrometrie výrazně zefektivňuje analýzu, snižuje pracovní nároky a zvyšuje reproducibilitu výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat plně automatizovanou metodu pro kvantifikaci volných metanephrinů v plazmě pomocí TurboFlow technologie v online režimu, přičemž byly zachovány analytické parametry původní off-line SPE metody. Hodnoceny byly klíčové ukazatele: limity kvantifikace, linearita, přesnost, přesnost, obnovitelnost, iontové potlačení, přenos a interference.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků byla využita technologie Thermo Scientific TurboFlow s kolonou Cyclone MCX-2 a iontovým párováním v perfluoroheptanové kyselině (PFHA). Analytická separace probíhala na Hypercarb kolonce (50×3 mm, 5 µm) při 70 °C. Detekce byla zajištěna na trojstupňovém kvadrupólu TSQ Vantage s ESI-II zdrojem, řízeném systémem Transcend TLX-1. Celkový analytický běh trval 12 minut.

Hlavní výsledky a diskuse

• Rozsah kvantifikace (LLOQ) byl stanoven na 6,3 pg/mL pro MN a 12,6 pg/mL pro NMN.
• Lineární oblast: 6,3–455,4 pg/mL pro MN a 12,6–954,5 pg/mL pro NMN (R2 ≥ 0,995).
• Obnova extrakce: absolutní 56–62 %, relativní >90 %.
• Přesnost (CV) inter- a intra-denní: 2,0–10,5 % pro oba analyty.
• Ionizační potlačení nebylo významné (poměry 113 % pro MN-d3, 126 % pro NMN-d3).
• Žádný významný carryover ani interference; epinephrin byl chromatograficky oddělen od NMN.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje:

• Více než 50% úsporu času přípravy vzorku oproti off-line SPE.
• Eliminaci nákladů na SPE sorbenty.
• Vysokou citlivost a reprodukovatelnost vhodnou pro klinický výzkum.
• Možnost přímé integrace do laboratorních workflow s minimální operátorskou intervencí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj online extrakce a miniaturizace kolonek směřuje k dalšímu zrychlení a ekologizaci metod. Budoucí aplikace mohou zahrnovat multitargetové analýzy dalších katecholaminů, automatizované _high‐throughput_ platformy a propojení s datovými systémy pro okamžité vyhodnocení biomarkerů v reálném čase.

Závěr

Vyvinutá metoda využívající Thermo Scientific TurboFlow je spolehlivým a efektivním nástrojem pro kvantifikaci plazmatických volných metanephrinů. Nabízí vysokou citlivost, robustní přesnost a značné zkrácení času přípravy vzorků, což ji předurčuje k rutinnímu nasazení v klinickém výzkumu a farmaceutické analýze.

Reference

• He X.; Kozak M. Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-Pairing Solid Phase Extraction and LC-MS/MS with Porous Graphitic Carbon Column, Thermo Scientific Application Note AN539.
• He X.; Gabler J.; Yuan C.; Wang S.; Shi Y.; Kozak M. Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-pairing Solid Phase Extraction and Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with Porous Graphitic Carbon Column, J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2011, 879(23), 2355–2359.
• Yuan C.; Kosewick J.; He X.; Kozak M.; Wang S. Sensitive Measurement of Serum 1,25-dihydroxy-vitamin D by LC-MS/MS after Removing Interference with Immunoaffinity Extraction, Rapid Commun. Mass Spectrom. 2011, 25(9), 1241–1249.
• He X.; Kozak M. Development of a Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry Method for Plasma-Free Metanephrines with Ion-pairing Turbulent Flow Online Extraction, Anal. Bioanal. Chem. 2012, 402(9), 3003–3010.