Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-Pairing Solid Phase Extraction and LC-MS/MS with Porous Graphitic Carbon Column

Význam tématu

Plazmatické volné metanefriny (metanefrin a normetanefrin) jsou klíčové biomarkery pro diagnostiku feochromocytomu a dalších endokrinních poruch. Přesná kvantifikace těchto vysoce polárních derivátů katecholaminů zajišťuje správnou klinickou interpretaci, vede k včasné diagnostice a monitorování léčebných postupů.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikované poznámky bylo navrhnout a validovat citlivou LC–MS/MS metodu pro stanovení plazmatických volných metanefrinů využívající iontově-parní SPE a chromatografii na porézním grafitovém uhlíku (PGC). Studie se zaměřuje na optimalizaci přípravy vzorků, chromatografické rozlišení a robustnost metody.

Použitá metodika

Vzorky plazmy byly nejprve ošetřeny na HyperSep C18 SPE kazetách s 0,1% perfluoroheptanovou kyselinou jako iontovým párem. Po nanesení vzorku následovalo promytí 0,1% PFHA a eluce 60% acetonitrilem. Suchý zbytek byl rekonstituován do mobilních fází pro LC–MS/MS.
Chromatografie probíhala na Thermo Scientific Hypercarb kolóně (50×2,1 mm, 5 μm) při 70 °C s gradientem formové kyseliny ve vodě/amoniu formiátu a 0,1% formové kyseliny v acetonitrilu (7 minut). Hmotnostní spektrometrie byla prováděna v pozitivním ESI režimu na TSQ Vantage s HESI-II ionizačním zdrojem.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific TSQ Vantage triple quadrupole MS
• Thermo Scientific Accela UHPLC systém
• Thermo Scientific Hypercarb PGC kolóna (50×2,1 mm, 5 μm)
• HESI-II heated ESI zdroj

Hlavní výsledky a diskuse

Interferenční testy prokázaly, že izobarické přechody epinefrinu a normetanefrinu lze chromatograficky oddělit na PGC kolóně. Absolutní výtěžnost SPE dosáhla 86–97 %, relativní výtěžnost byla 98–113 %. Ionové potlačení bylo minimalizováno. Lineární rozsah stanovení pokrývá 7,2–486,8 pg/mL pro metanefrin a 18,0–989,1 pg/mL pro normetanefrin, s dolní mezí kvantifikace (LLOQ) 7,2 pg/mL a 18,0 pg/mL. Opakovatelnost metody (intra- i inter-denní CV) se pohybovala mezi 2,1 a 10,9 %. Nebyla zjištěna významná kontaminace (carry-over) až do koncentrací 500–1000 ng/mL.

Přínosy a praktické využití metody

Tato validovaná LC–MS/MS metoda nabízí vysokou citlivost, přesnost a specifitu při minimální spotřebě reagencií. Díky jednoduché SPE přípravě a rychlé chromatografii přispívá k efektivitě rutinního klinického testování a zlepšuje diagnostickou spolehlivost pro pacienty s podezřením na feochromocytom.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším krokem může být automatizace SPE, rozšíření panelu polárních metabolitů a integrace high-resolution MS nebo ion mobility technologií pro další zvýšení selektivity. Vývoj softwarových nástrojů pro pokročilou datovou analýzu podpoří personalizovanou medicínu.

Závěr

Byla vyvinuta a validována robustní LC–MS/MS metoda pro kvantitativní stanovení volných metanefrinů v plasmě s vysokou citlivostí a reprodukovatelností. Metoda je vhodná pro klinické aplikace i výzkumné studie.

Reference

1. He X.; Gabler J.; Yuan C.; Wang S.; Shi Y.; Kozak M. Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-pairing Solid Phase Extraction and Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with Porous Graphitic Carbon Column. J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2011, 879(23), 2355-2359.