Extraction of Aflatoxins and Ochratoxin from Dried Chili Using ISOLUTE® Myco Prior to LC-MS/MS Analysis
Aplikace | 2014 | BiotageInstrumentace
Mykotoxiny, jako jsou aflatoxiny a ochratoxin A, představují závažné riziko pro zdraví spotřebitelů i pro potravinářský průmysl. Sušené chilli papričky mohou být kontaminovány těmito toxiny během pěstování, sklizně i skladování. Regulace Evropské unie stanovují přísné limity pro jejich obsah a vyžadují citlivé a spolehlivé analytické postupy pro kontrolu kvality potravin.
Cílem aplikace bylo navrhnout a validovat protokol solid phase extraction (SPE) s využitím sloupků ISOLUTE Myco pro extrakci aflatoxinů B1, B2, G1, G2 a ochratoxinu A ze sušeného chilli před kvantifikací pomocí LC-MS/MS. Studie hodnotila výtěžnost extrakce, opakovatelnost a splnění požadavků EU včetně mezí stanovitelnosti (LOQ) a mezí průměrné chyby (%RSDr).
Vzorek 5 g mletého sušeného chilli byl extrahován 80% acetonitrilem, následně zředěn vodou a přečištěn na sloupcích ISOLUTE Myco (60 mg/3 mL). Po sušení eluátů v TurboVap LV byla vzorka rekonstituována a filtrována do LC-MS/MS.
Seznam instrumentace:
Parametry separace: mobilní fáze A (1 mM amonný acetát, 0,5 % kyseliny octové ve vodě) a B (analogicky v 95 % metanolu), flow 0,45 mL·min⁻¹, gradient do 100 % B za 7,2 min, teplota kolony 40 °C.
MS/MS měření v pozitivním iontovém módu pomocí MRM přechodů optimalizovaných pro každou mykotoxinovou látku.
Metoda vykázala vysokou linearitu (r2 > 0,997) v rozsahu 0,5–80 µg·kg⁻¹ pro aflatoxiny a 5–80 µg·kg⁻¹ pro ochratoxin A. LOQ skutečně dosažené byly 2–4 µg·kg⁻¹ pro aflatoxiny a 10 µg·kg⁻¹ pro ochratoxin A. Opakovatelnost (%RSDr) se pohybovala pod 3,2 % a průměrné recovery dosáhly 89–108 %, splňující cílové rozmezí 70–110 %.
Navržený postup nabízí rychlou a účinnou očistu vzorku chilli před LC-MS/MS analýzou s minimálními matrixovými interferencemi. Jednotný protokol SPE s ISOLUTE Myco umožňuje snadnou implementaci v rutinních laboratořích QA/QC, potravinářském výzkumu i akademické sféře.
Očekává se rozšíření SPE protokolů o další toxické sekundární metabolity plísní, miniaturizace a automatizace přípravy vzorků, integrace s vysokým rozlišením hmotnostní spektrometrie (HRMS) pro screening širšího spektra mykotoxinů a více analyzovaných matic.
Vyvinutá metoda založená na SPE se sloupky ISOLUTE Myco a následné LC-MS/MS analýze prokázala vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost. Splňuje požadavky EU na stanovení aflatoxinů a ochratoxinu A ve sušeném chilli a je vhodná pro rutinní monitoring kvality potravin.
Příprava vzorků, Spotřební materiál, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníPotraviny a zemědělství
VýrobceShimadzu, SCIEX, Biotage
Souhrn
Význam tématu
Mykotoxiny, jako jsou aflatoxiny a ochratoxin A, představují závažné riziko pro zdraví spotřebitelů i pro potravinářský průmysl. Sušené chilli papričky mohou být kontaminovány těmito toxiny během pěstování, sklizně i skladování. Regulace Evropské unie stanovují přísné limity pro jejich obsah a vyžadují citlivé a spolehlivé analytické postupy pro kontrolu kvality potravin.
Cíle a přehled studie
Cílem aplikace bylo navrhnout a validovat protokol solid phase extraction (SPE) s využitím sloupků ISOLUTE Myco pro extrakci aflatoxinů B1, B2, G1, G2 a ochratoxinu A ze sušeného chilli před kvantifikací pomocí LC-MS/MS. Studie hodnotila výtěžnost extrakce, opakovatelnost a splnění požadavků EU včetně mezí stanovitelnosti (LOQ) a mezí průměrné chyby (%RSDr).
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek 5 g mletého sušeného chilli byl extrahován 80% acetonitrilem, následně zředěn vodou a přečištěn na sloupcích ISOLUTE Myco (60 mg/3 mL). Po sušení eluátů v TurboVap LV byla vzorka rekonstituována a filtrována do LC-MS/MS.
Seznam instrumentace:
- SPE sloupky ISOLUTE Myco 60 mg/3 mL
- TurboVap LV (Biotage) pro sušení eluátů
- UHPLC Shimadzu Nexera s kolonkou Kinetex XB-C18 (50×2,1 mm, 2,6 μm)
- MS detektor AB Sciex Triple Quad 5500 se zdrojem Turbo-V ESI
Parametry separace: mobilní fáze A (1 mM amonný acetát, 0,5 % kyseliny octové ve vodě) a B (analogicky v 95 % metanolu), flow 0,45 mL·min⁻¹, gradient do 100 % B za 7,2 min, teplota kolony 40 °C.
MS/MS měření v pozitivním iontovém módu pomocí MRM přechodů optimalizovaných pro každou mykotoxinovou látku.
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda vykázala vysokou linearitu (r2 > 0,997) v rozsahu 0,5–80 µg·kg⁻¹ pro aflatoxiny a 5–80 µg·kg⁻¹ pro ochratoxin A. LOQ skutečně dosažené byly 2–4 µg·kg⁻¹ pro aflatoxiny a 10 µg·kg⁻¹ pro ochratoxin A. Opakovatelnost (%RSDr) se pohybovala pod 3,2 % a průměrné recovery dosáhly 89–108 %, splňující cílové rozmezí 70–110 %.
Přínosy a praktické využití metody
Navržený postup nabízí rychlou a účinnou očistu vzorku chilli před LC-MS/MS analýzou s minimálními matrixovými interferencemi. Jednotný protokol SPE s ISOLUTE Myco umožňuje snadnou implementaci v rutinních laboratořích QA/QC, potravinářském výzkumu i akademické sféře.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se rozšíření SPE protokolů o další toxické sekundární metabolity plísní, miniaturizace a automatizace přípravy vzorků, integrace s vysokým rozlišením hmotnostní spektrometrie (HRMS) pro screening širšího spektra mykotoxinů a více analyzovaných matic.
Závěr
Vyvinutá metoda založená na SPE se sloupky ISOLUTE Myco a následné LC-MS/MS analýze prokázala vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost. Splňuje požadavky EU na stanovení aflatoxinů a ochratoxinu A ve sušeném chilli a je vhodná pro rutinní monitoring kvality potravin.
Reference
- Biotage (2014) Application Note AN785: Extraction of Aflatoxins and Ochratoxin from Dried Chili Using ISOLUTE Myco prior to LC-MS/MS Analysis.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Extraction of Multiple Mycotoxins From Nuts Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis
2013|Shimadzu|Aplikace
Application Note AN784 Extraction of Multiple Mycotoxins from Nuts Using ISOLUTE® Myco | Page 1 Extraction of Multiple Mycotoxins From Nuts Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis This application note describes a Solid Phase Extraction (SPE) protocol for the…
Klíčová slova
myco, mycomycotoxins, mycotoxinsisolute, isoluteochratoxin, ochratoxinactual, actualbrazil, braziltarget, targetprotocol, protocolnut, nutrsdr, rsdrpeanut, peanutextraction, extractionrack, rackgroundnut, groundnuteurope
Extraction of Multiple Mycotoxins From Grain Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis
2013|Shimadzu|Aplikace
Application Note AN782 Extraction of Multiple Mycotoxins from Grain Using ISOLUTE® Myco | Page 1 Extraction of Multiple Mycotoxins From Grain Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis This application note describes a Solid Phase Extraction (SPE) protocol for the…
Klíčová slova
myco, mycoactual, actualergocornine, ergocornineergocryptine, ergocryptinezearalenone, zearalenonetarget, targetochratoxin, ochratoxinprotocol, protocolmycotoxins, mycotoxinsrsdr, rsdrisolute, isolutegrain, grainrecovery, recoveryextraction, extractionspe
Extraction of Multiple Mycotoxins From Cereal Based Infant Food Using ISOLUTE® Myco prior to UHPLC MS/MS Analysis
2014|Shimadzu|Aplikace
Application Note AN823 Extraction of Multiple Mycotoxins From Cereal Based Infant Food | Page 1 Extraction of Multiple Mycotoxins From Cereal Based Infant Food Using ISOLUTE Myco prior to UHPLC MS/MS Analysis ® Introduction This application note describes a Solid…
Klíčová slova
mycotoxins, mycotoxinscereal, cerealochratoxin, ochratoxininfant, infantmyco, mycozearalenone, zearalenoneisolute, isoluteactual, actualprotocol, protocolextraction, extractionuhplc, uhplctarget, targetanalytes, analytestransition, transitioneurope
Extraction of Multiple Mycotoxins From Animal Feed Using ISOLUTE® Myco SPE Columns prior to LC-MS/MS Analysis
2013|Shimadzu|Aplikace
Application Note AN804 Extraction of Multiple Mycotoxins From Animal Feed Using ISOLUTE® Myco | Page 1 Extraction of Multiple Mycotoxins From Animal Feed Using ISOLUTE Myco SPE Columns prior to LC-MS/MS Analysis ® This application note describes a Solid Phase…
Klíčová slova
myco, mycomycotoxins, mycotoxinsdeoxynivalenol, deoxynivalenolisolute, isoluteactual, actualzearalenone, zearalenoneochratoxin, ochratoxinfeed, feedtarget, targettrichothecene, trichotheceneprotocol, protocolrsdr, rsdrmycotoxin, mycotoxinrecovery, recoveryextraction
