Extraction of Multiple Mycotoxins From Grain Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Mykotoxiny jsou toxické sekundární metabolity plísní kontaminující obilniny a představují významné riziko pro potravinářský průmysl i veřejné zdraví. Kontrola jejich obsahu je proto podřízena přísné legislativě, přičemž moderní analytické techniky musí zaručit vysokou citlivost, spolehlivost a schopnost multiplexního stanovení více analyzovaných látek z různých matic.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace AN782 je představit jednoduchý a univerzální protokol pevné fáze (SPE) pro extrakci celé řady mykotoxinů z pšenice, kukuřice, ječmene a mouky před analýzou LC–MS/MS. Studie demonstruje optimalizaci podmínek přípravy vzorků za účelem dosažení vysokých procent návratnosti a shody s požadavky evropských norem.

Použitá metodika a instrumentace

Popis postupu přípravy vzorku:

• Mletí vzorku obilí (50 g) a skladování v suchu.
• Extrahování 5 g mletého vzorku v 50 % acetonitrilu (20 mL), třepání 30 min, centrifugace (3000 g, 10 min).
• Ředění supernatantu vodou (poměr 1:4), opětovná centrifugace (3000 g, 10 min).

Solid‐phase extraction (SPE) s kolonkou ISOLUTE Myco (60 mg/3 mL):

• Kondicionace acetonitrilem a ekvilibrace vodou (2 mL).
• Naložení vzorku (3 mL), praní vodou a 10 % acetonitrilem (3 mL).
• Sušení, eluace kyselinou mravenčí v acetonitrilu a metanolem (po 2 mL).
• Koncentrace eluátu, rekonstituce v 0,1 % kyselině octové v 20 % acetonitrilu:metanolu, filtrace 0,2 µm PTFE.

HPLC–MS/MS podmínky:

• UHPLC Shimadzu Nexera, kolona Kinetex XB‐C18 (50×2,1 mm, 2,6 µm).
• Gradientní eluce s 1 mM acetátem amonným a 0,5 % kyselinou octovou, na 0,45 mL/min, injekce 20 µL.
• MS AB Sciex Triple Quad 5500 s Turbo‐V ESI, duální polarita, MRM režim.

Hlavní výsledky a diskuse

Pro všechny analyzované mykotoxiny (aflatoxiny B1, B2, G1, G2, ochratoxin A, fumonisin B1, zearalenon, T‐2, HT‐2, ergokornin, ergokryptin) byly dosaženy:

• Linearity r² > 0,998 v širokých pracovních rozsazích (0,1–200 ng/mL on-column).
• Mez stanovení (LOQ) splňující požadavky EU, typicky 0,67–26,7 µg/kg v matrici.
• Opakovatelnost RSD ≤ 19 % a návratnosti mezi 73–110 %.

Výsledky ukazují dobré oddělení i nízkou úroveň rušivých vlivů matic při použití ISOLUTE Myco.

Přínosy a praktické využití metody

Protokol umožňuje:

• Multiplexní stanovení širokého spektra mykotoxinů v různých obilných maticích.
• Rychlou a reprodukovatelnou přípravu vzorků se snadnou manipulací.
• Využití jednoho produktu (ISOLUTE Myco) zjednodušujícího validaci a standardizaci analýz.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšiřování panelu analyzovaných toxinů, integrace plně automatizovaných SPE modulů a zdokonalení citlivosti MS detekce. Nové sorbenty a hybridní materiály mohou dále zvýšit selektivitu a snížit náklady na přípravu vzorků.

Závěr

Prezentovaný SPE protokol s využitím ISOLUTE Myco v kombinaci s LC–MS/MS poskytuje spolehlivé, citlivé a reprodukovatelné stanovení klíčových mykotoxinů v obilninách. Metoda splňuje požadavky evropských nařízení a lze ji snadno implementovat ve výzkumných i průmyslových laboratořích.

Reference

• Žádné uvedené.