Extraction of Multiple Mycotoxins From Animal Feed Using ISOLUTE® Myco SPE Columns prior to LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Mycotoxiny jsou toxické metabolity vznikající plísněmi na krmných surovinách a představují významné riziko pro zdraví zvířat i kvalitu potravin živočišného původu. Přísná evropská legislativa vyžaduje citlivé a spolehlivé analytické postupy k detekci a kvantifikaci těchto toxinů.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo optimalizovat a ověřit protokol extrakce a čistění různých tříd mycotoxinů z krmiva pomocí ISOLUTE Myco SPE kolon následované analýzou LC-MS/MS. Studie hodnotila návratnost, přesnost, linearitu a limity stanovení pro hlavní mykotoxiny v odlišných matricích.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: rozemletí 5 g krmiva, extrakce 1–4% kyselinou a acetonem (pro většinu toxinů) nebo 1% kyselinou (pro trichotheceny typu B), centrifugace a ředění.
• SPE: kolony ISOLUTE Myco 60 mg/3 mL; kroky kondicionace acetonitrilem, ekvilibrace vodou, praní (voda, 10% acetonitril), eluce formiátovými a methanolovými roztoky.
• Sušení eluátů: TurboVap LV (35 °C, 1,5 bar) nebo SPE Dry (2 bar) a rekonstituce v roztoku acetonitril–methanol s kyselinou octovou.
• UHPLC: Shimadzu Nexera, kolona Kinetex XB-C18 (50 × 2,1 mm, 2,6 μm), gradient amoniak-acetátových pufrů a methanolu, průtok 0,45 mL/min.
• MS/MS: AB Sciex Triple Quad 5500 s Turbo-V ESI, duální polarita, MRM pro specifické iontové přechody, optimalizované parametry (DP, EP, CE, CXP).

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala v rozsahu analytických koncentrací vynikající linearitu (r2 > 0,99) a limity stanovení splňující evropské požadavky. Opakovatelnost (RSDr) byla < 20 % a recoverie se pohybovaly mezi 84 a 110 % pro analyty v různých krmivech. Chromatogramy potvrdily efektivní oddělení a nízký vliv matrice.

Přínosy a praktické využití metody

• Univerzální protokol pro více tříd mycotoxinů v rámci jednoho vzorku.
• Splnění legislativních požadavků na stanovení mycotoxinů v krmivech.
• Redukce pracovního času a spotřeby rozpouštědel díky integrovanému SPE řešení.
• Vhodné pro rutinní QA/QC laboratoře a výzkumné projekty.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SPE kroků a zvýšení propustnosti vzorků.
• Rozšíření metodiky na další matrice, např. krmné směsi či potraviny.
• Pokročilé sorbenty s vyšší selektivitou a kombinace s vysokým rozlišením MS.
• Integrace datové analýzy a strojového učení pro predikci kontaminace.

Závěr

Navržená SPE-LC-MS/MS metoda s použitím ISOLUTE Myco poskytuje spolehlivou, citlivou a reprodukovatelnou analýzu klíčových mycotoxinů v krmivech. Díky vysokým recoveriím a nízkým LOQ je vhodná pro rutinní monitoring a plně odpovídá požadavkům EU.

Reference

• Biotage Application Note AN804, 2013