Extraction of Multiple Mycotoxins From Cereal Based Infant Food Using ISOLUTE® Myco prior to UHPLC MS/MS Analysis

Význam tématu

Mykotoxiny představují riziko pro zdraví kojenců a batolat konzumujících cereální potraviny. Přítomnost aflatoxinů, ochratoxinu A, fumonisinu, zearalenonu či trichothecenů v dětské výživě je přísně regulována kvůli jejich toxickým účinkům. Spolehlivá příprava vzorku a citlivá detekční technika umožňují kontrolovat nízké hladiny kontaminantů a naplňovat legislativní limity.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace je demonstrovat protokol extrakce více tříd mykotoxinů z cereálních dětských potravin pomocí sorpční kolonky ISOLUTE Myco a následné stanovení UHPLC-MS/MS. Studie ukazuje dosažitelné limity kvantifikace (LOQ), opakovatelnost a návratnost analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Postup přípravy vzorku:

• Rozmělnění 5 g sušeného produktu s NaCl a 60 % metanolovým extrakčním roztokem.
• Centrifugace, naředění vodou a druhá centrifugace.
• SPE na ISOLUTE Myco 60 mg/3 mL: kondicionace acetonitrilem, ekvilibrace vodou, načtení vzorku, dvojité praní vodou a 10 % acetonitrilem, sušení a dvoustupňové eluční činidla (0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu/vode a methanolu).
• Odpaření eluátu, rekonstituce v 0,1 % kyselině octové v metanol:acetonitril:voda 1:1:8 a filtrace PTFE 0,2 µm.

UHPLC-MS/MS podmínky:

• UHPLC: Shimadzu Nexera, kolona Kinetex XB-C18 50×2,1 mm, 1,7 µm, gradient AMK + acetic acid vs. 95 % metanol s AMK.
• Flow 0,6 mL/min, injekce 20 µL, teplota kolony 40 °C, vzorku 15 °C, doba analýzy 8,2 min.
• MS: AB Sciex Triple Quad 5500, Turbo-V ESI (+5,0 kV/–4,5 kV), dual polarity, MRM režim.

Použitá instrumentace

• SPE kolony ISOLUTE Myco 60 mg/3 mL (Biotage).
• Manifold VacMaster a TurboVap LV pro odpařování eluátu.
• UHPLC systém Shimadzu Nexera s Kinetex XB-C18 kolónou.
• MS detektor AB Sciex Triple Quad 5500 s ESI zdrojem.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje:

• LOQ 0,2–2 µg/kg pro aflatoxiny a ochratoxin A, 2–9 µg/kg pro ostatní mykotoxiny.
• r² kalibrací nad 0,99 pro většinu analyzovaných komponent.
• Opakovatelnost (%RSD) 3–11 % a návratnost 65–99 %.

Křivky kalibrace pro AB1 a T-2 toxin ukazují lineárnost i v nízkých úrovních. Chromatogramy pro 2 µg/kg (aflatoxiny, ochratoxin A) a 20 µg/kg (ostatní) potvrzují citlivost a selektivitu.

Přínosy a praktické využití metody

Protokol nabízí jednotné řešení pro různé třídy mykotoxinů ve složitých matricích. Metoda je rychlá (do 30 min přípravy plus 8 min analýzy), robustní a kompatibilní s rutinou QA/QC v potravinářských či regulačních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k:

• automatizaci přípravy vzorků pomocí robotických SPE stanic,
• rozšíření panelu analyzovaných toxinů (emerging mycotoxins),
• integraci HRMS pro potvrzovací analýzu nedefinovaných kontaminantů,
• vývoji rychlých on-line SPE-UHPLC-MS/MS postupů.

Závěr

Popsaný protokol s ISOLUTE Myco a UHPLC-MS/MS poskytuje citlivou a spolehlivou analýzu více mykotoxinů z cereálních dětských potravin. Splňuje požadavky evropských limitů a nabízí vysoké výtěžky, dobrou opakovatelnost a krátkou dobu vyšetření.

Reference

• Biotage Application Note AN823, 2014.
• Commission Regulation (EC) No 1881/2006, setting maximum levels for certain contaminants in food.