Exemplary performance data of a Triple Quadrupole Mass Spectrometer in a Simulated Clinical LDT Workflow

Význam tématu

Rychlá a spolehlivá tvorba laboratorně diagnostických testů (LDT) je zásadní při monitorování imunosupresiv a steroidů v klinické praxi. Optimalizace metod pomocí LC-MS/MS napomáhá zkrátit čas vývoje, zvýšit přesnost měření a zajistit konzistenci výsledků napříč různými laboratořemi.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na využití automatizované funkce optimalizace sloučenin vestavěné v instrumentálním řídicím software (ICSW) pro vytváření LDT metod. Testování proběhlo na systémech TSQ Quantis MD a TSQ Altis MD se třemi různými HPLC konfiguracemi a ve dvou režimech ionizace. Analyzované třídy látek zahrnovaly hlavní imunosupresiva (Cyklosporin A, Everolimus, Sirolimus, Takrolimus) a steroidy (estron, testosteron).

Použitá metodika

Vzorky imunosupresiv byly připraveny vysrážením srážecím činidlem obsahujícím ZnSO4 a metanol s interním standardem. Steroidy byly extrahovány MTBE a rekonstituovány v methanol-voda. Optimalizace zdrojových a fragmentačních parametrů probíhala infuzí testovacích roztoků ze stříkačky přímo do hmotnostního spektrometru. Lineární gradient chromatografie využíval kolony Hypersil GOLD C8 a Accucore aQ ve Vanquish MD HPLC, mobilní fáze s formiátovým pufrem a ammoniumfluoridem, v závislosti na tříde analyzovaných sloučenin. Data zpracovávala aplikace TraceFinder LDT.

Hlavní výsledky a diskuse

Metody vykázaly vysokou linearitu (R2 > 0,997) a nízkou mez detekce (LOQ 0,01–0,03 ng/ml pro steroidy). Variabilita (%RSD) intradeních a mezisystémových měření byla většinou pod 5 % pro QC vzorky imunosupresiv a steroidů. Výsledky potvrzují přenositelnost optimalizovaných parametrů mezi různými přístroji a HPLC konfiguracemi bez významné ztráty přesnosti či citlivosti.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá tvorba metod LDT bez nutnosti manuálního ladění parametrů.
• Vysoká reprodukovatelnost napříč přístroji a laboratořemi.
• Podpora monitorování imunosupresiv a steroidů v klinické farmakokinetice a QA/QC procesech.

Použitá instrumentace

• Hmotnostní spektrometry Thermo Scientific TSQ Quantis MD a TSQ Altis MD
• HPLC Vanquish MD s kolónami Hypersil GOLD C8 (50×2,1 mm, 5 µm) a Accucore aQ (100×2,1 mm, 2,6 µm)
• Řídicí software Instrument Control Software (ICSW) pro automatickou optimalizaci
• Software TraceFinder LDT pro sběr dat a vyhodnocení QC

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace umělé inteligence pro adaptivní optimalizaci metod.
• Rozšíření přístupu o další biologicky důležité třídy látek (metabolity, lékové zbytky).
• Propojení s laboratorními informačními systémy a cloudové sdílení validovaných metod.
• Využití vysoce propustných systémů a mikrochromatografie pro rychlejší analýzy.

Závěr

Automatizovaná optimalizace masově spektrometrických parametrů zabudovaná v řídicím softwaru umožňuje efektivně vytvářet robustní LDT metody pro monitorování imunosupresiv a steroidů. Metody prokázaly konzistentní linearitu, citlivost a nízkou variabilitu mezi různými přístroji a chromatografickými konfiguracemi, což usnadňuje jejich nasazení v klinických a průmyslových laboratořích.