Testing robustness: Immunosuppressant drugs in blood with a TSQ Quantis MS for clinical research

Význam tématu

Imunosupresivní léky jako takrolimus, sirolimus, everolimus a cyklosporin A se široce využívají v transplantologii a onemocněních autoimunity. Přesná a spolehlivá kvantifikace jejich koncentrace v krvi je klíčová pro optimalizaci léčby a výzkum. Hmotnostní spektrometrie s trojčetným kvadrupólem nabízí vysokou citlivost, selektivitu a robustnost potřebnou pro klinické aplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit dlouhodobou stabilitu a reprodukovatelnost analýzy vybraných imunosupresiv v celém krevním vzorku na platformě Thermo Scientific™ TSQ Quantis™. Pět po sobě jdoucích dnů se v každé sekvenci analyzovalo přibližně 300 vzorků (kalibrátorů, kontrol a blanků), celkem více než 1500 injekcí.

Použitá metodika

Vzorky byly připraveny srážením krevního vzorku roztokem ZnSO4 v metanolu, obsahujícím interní standardy (cyclosporin D a ascomycin). Po vortexaci, chlazení a centrifugaci se odebrala supernatantní fáze a 15 µl vzorku bylo injikováno do HPLC systému. Tento postup účinně odstraňuje proteiny, zatímco fosfolipidy zůstávají jako sledované markerové sloučeniny pro čistotu systému.

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie: Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex Binary HPLC s kolonkou Hypersil GOLD™ C8 (50×2,1 mm, 5 µm) při 80 °C.
• Mobilní fáze: voda a methanol s 10 mM formiátu amonného a 0,1 % kyseliny mravenčí.
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific™ TSQ Quantis™ s heated electrospray ionization (H-ESI). SRM monitorovalo dva přechody pro analyty a jeden pro interní standardy; sledovány byly i surrogáty (dioctylftalát, endogenní fosfolipidy).
• Software: Thermo Scientific™ TraceFinder™ pro akvizici a vyhodnocení dat.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky byly lineární v rozsahu 2–60 ng/ml pro takrolimus, sirolimus a everolimus a 25–1800 ng/ml pro cyklosporin A. Všechny zpětné výpočty kalibrátorů se pohybovaly v mezích ±20 % nominálních hodnot během pěti dnů. Robustnost prokázaly interní standardy s RSD 4 % (cyclosporin D) a 8 % (ascomycin) přes 1500 injekcí. Kvalitativní kontroly pro analyty dosáhly RSD mezi 2,36 % a 4,22 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje vysokou průchodnost vzorků bez potřeby časté údržby, zachovává přesnost a reprodukovatelnost výsledků a lze ji nasadit ve studiích klinického výzkumu, farmakovigilance i rutinním QA/QC při terapeutickém monitorování.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávají se další optimalizace pro multiplexní vyšetření širší škály imunomodulant, miniaturizace systémů pro bodové nasazení (POC), digitalizace workflow a využití umělé inteligence pro pokročilé vyhodnocení dat a prediktivní modelování farmakokinetiky.

Závěr

Thermo Scientific TSQ Quantis prokázal vysokou robustnost, spolehlivost a konzistentní výkon při analýze imunosupresiv v krevních vzorcích, což jej předurčuje pro náročné klinické studie a terapeutické monitorování.