LCMS Bioanalysis of Antibody Drugs Using Fab- Selective Proteolysis nSMOL - Part 4 - Multiplex Analysis -

Význam tématu

nSMOLTM představuje průlomovou metodiku pro selektivní proteolýzu Fab fragmentů monoklonálních protilátek, umožňující univerzální přístup k bioanalýze protilátek. Tato technologie zvyšuje efektivitu metodického vývoje a zajišťuje konzistentní validaci v souladu s japonskými i mezinárodními pravidly pro bioanalytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat schopnost multiplexní kvantitativní analýzy několika monoklonálních protilátek v jediném LC–MS/MS běhu za použití nSMOL kits. V modelu byly simultánně analyzovány Brentuximab vedotin, Rituximab a Cetuximab ve vzorcích lidské plazmy.

Použitá metodika

Vzorky plazmy byly podrobeny selektivnímu štěpení Fab fragmentů pomocí nanopartiklí nesoucích trypsin (nSMOL). Po inkubaci a odfiltrování došlo k chromatografické separaci na Shim-pack GISS C18 koloně pomocí gradientu formiát–acetonitril. Detekce proběhla v režimu MRM na LCMS-8050/8060.

Použitá instrumentace

• LC systém: NexeraX2
• Kolona: Shim-pack GISS C18 (50 × 2,1 mm), 50 °C
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě
• Mobilní fáze B: 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu
• Průtok: 0,4 mL/min, injekce 10 μL
• MS: LCMS-8050 a 8060, ESI pozitivní ionizace, DL 250 °C, Heat Block 400 °C, Interface 300 °C, nebulizační plyn 3 L/min, sušící plyn 10 L/min, topný plyn 10 L/min

Hlavní výsledky a diskuse

Multiplexní kalibrace pro všechny tři protilátky prokázala lineární rozsah 0,58–300 μg/mL s přesností 91,5–115 % a opakovatelností CV 4,4–11,8 %. Dolní hranice kvantifikace byla stanovena na 0,58 μg/mL. Naměřené hodnoty přesnosti a opakovatelnosti ve všech testovaných koncentracích splnily kritéria FDA pro bioanalytické metody.

Přínosy a praktické využití metody

Tato strategie umožňuje rychlou a přesnou kvantifikaci vícenásobných protilátek v jedné analýze, což zjednodušuje vývoj i kontrolu kvality lékových forem. Metoda je použitelná od preklinických studií až po klinické farmakokinetické studie, včetně kombinovaných terapií.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření multiplexních protokolů na širší panel protilátek, integrace s automatizovanými přípravami vzorků a využití pro personalizovanou medicínu. Další zdokonalení cílí na zvýšení propustnosti a zkrácení doby analýzy.

Závěr

nSMOLTM multiplexní analýza poskytuje robustní, validovanou a univerzální platformu pro bioanalýzu monoklonálních protilátek, podporující zrychlený vývoj a kontrolu kvality terapeutických protilátek.

Reference

• Iwamoto N. et al. Analyst. 2014; DOI:10.1039/c3an02104a
• Iwamoto N. et al. Clinical Pharmacology & Biopharmaceutics. 2016; DOI:10.4172/2167-065X.1000164