LCMS Bioanalysis of Antibody Drugs Using Fab-Selective Proteolysis nSMOL- Part 2 - Bevacizumab analysis -

Význam tématu

Bioanalýza monoklonálních protilátek je klíčová pro vývoj, kontrolu kvality a farmakokinetické studie v preklinickém i klinickém výzkumu. Metoda nSMOL umožňuje selektivní proteolýzu Fab fragmentu protilátek, což výrazně zjednodušuje vývoj robustních LC-MS analytických metod bez ohledu na typ protilátky.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit aplikovatelnost metody nSMOL pro kvantitativní stanovení bevacizumabu v lidské plazmě a potvrdit splnění validačních kritérií podle japonských i mezinárodních směrnic bioanalytické metodiky.

Použitá metodika a instrumentace

Sample processing využívá jednotný protokol nSMOL pro všechny monoklonální protilátky, zahrnující selektivní štěpení Fab regionu. Analytická část byla provedena na LC-MS sestavě:

• LC: Nexera X2, Shim-pack GISS C18 (50×2,1 mm), 50 °C, mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí/voda, B: 0,1 % kyseliny mravenčí/acetonitril, gradient 1 %→35 %→95 %→1 % B, 0,4 mL/min, injekce 10 µL
• MS: LCMS-8050/8060, ESI pozitivní ionizace, DL 250 °C, Heat Block 400 °C, Interface 300 °C, nebulizace 3 L/min, sušení 10 L/min, vyhřívací plyn 10 L/min

Hlavní výsledky a diskuse

Byly vybrány signaturní peptidy z CDR2 regiónu bevacizumabu pro kvantifikaci a potvrzení struktury. Metoda dosáhla kvantifikačního rozsahu 0,15–300 µg/mL v lidské plazmě s průměrnou přesností 101,3 %. Preciznost, přesnost, stabilita (freeze-thaw, dlouhodobá i zpracovaného vzorku) i interferences testy splnily požadovaná kritéria. Multiplexní stanovení tří peptidových sekvencí demonstrovalo vysokou univerzálnost a spolehlivost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nSMOL poskytuje rychlý a univerzální přístup k bioanalytickému stanovení monoklonálních protilátek od preklinických modelů až po klinické studie. Umožňuje zkrátit dobu vývoje metodiky a minimalizovat optimalizaci pro jednotlivé cílové protilátky.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace nSMOL na bispecifické protilátky, konjugáty a biosimilars. Kombinace s vysokorychlostními MS systémy a plná automatizace připravy vzorků přispěje ke zvýšení throughput i reprodukovatelnosti.

Závěr

nSMOL technologie pro selektivní proteolýzu Fab fragmentu protilátek prokázala vysokou citlivost, specifiku a validaci v souladu s mezinárodními standardy. Analýza bevacizumabu v lidské plazmě potvrdila její schopnost robustní a univerzální bioanalytické aplikace.

Reference

• Iwamoto N et al. Analyst, 2014, DOI:10.1039/c3an02104a
• Iwamoto N et al. Drug Metab Pharmacokinet., 2016, DOI:10.1016/j.dmpk.2015.11.004