A Simple Conversion of the USP Assay Method for Benzocaine Lozenges to the Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8 Column

Význam tématu

Farmaceutické laboratoře často využívají kompendiální metody USP pro testování surovin i hotových produktů. Tradiční HPLC analýzy na 5 µm C8 kolonách trvají až 15 minut na vzorek a spotřebovávají značné množství rozpouštědel. Moderní superficially porous particle kolonky, jako Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8, umožňují zkrácení doby analýzy a úsporu rozpouštědel bez nutnosti rozsáhlé revalidace metod.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo převést oficiální USP test pro stanovení benzokainu v pastilkách z původní 5 µm ZORBAX Eclipse Plus C8 kolony (4,6 × 250 mm) na kratší a efektivnější superficially porous particle kolonky InfinityLab Poroshell 120 EC-C8. Prioritou bylo zachovat systémovou způsobilost metody dle USP <621> a současně výrazně snížit dobu analýzy a spotřebu mobilní fáze.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika vychází z USP postupu, kde jsou povoleny přesně definované úpravy délky kolony a velikosti částic při zachování pravidel L/dp (– 25 % až + 50 %) nebo N (– 25 % až + 50 %). Původní mobilní fáze byla připravena smísením acetonitrilu, vody a 1 M roztoku monobazické fosforečnanu při pH 3,0 v poměru 200:750:50. Standardní roztoky benzokainu byly připraveny v diluentech A (0,1 N HCl) a B (1:1 acetonitril : voda).
Instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II LC: binární pumpa, multisampler, multikolonový termostat, diode array detektor FS
• Software Agilent OpenLab CDS
• Kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8: 4,6 × 150 mm, 4 µm; 4,6 × 150 mm, 2,7 µm; 4,6 × 100 mm, 2,7 µm; 4,6 × 75 mm, 2,7 µm

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky potvrdily, že přechod na superficially porous particle kolony vede ke zkrácení doby analýzy až o 70 % při zachování shody se systémovou způsobilostí:

• 150 mm, 4 µm – úspora 40 %, doba analýzy 9 min při tlaku 264 bar
• 150 mm, 2,7 µm – úspora 40 %, doba analýzy 6,4 min při tlaku 421 bar
• 100 mm, 2,7 µm – úspora 60 %, doba analýzy cca 6 min při tlaku 314 bar
• 75 mm, 2,7 µm – úspora 70 %, doba analýzy 4,5 min při tlaku 287 bar

Účinnost kolony (N), faktor špičkování (< 1,5) i opakovatelnost výsledků (RSD ≤ 2 %) splňují limity USP, a to bez dodatečné revalidace metody.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace kratších superficially porous particle kolon zvyšuje propustnost laboratoře, snižuje spotřebu organických rozpouštědel a umožňuje flexibilní nasazení na stávajících LC přístrojích. Laboratoře tak dosahují vyšší efektivity a nižších provozních nákladů bez investic do nového vybavení.

Budoucí trendy a možnosti využití

Výhledově se očekává rozšířené nasazení superficially porous particle technologií v kompendiálních i vlastních kvalitativních a kvantitativních analýzách. Dalšími kroky mohou být přechod na ultrarychlé UHPLC/UPLC metody, integrace s automatizačními systémy a aplikace v online monitoringu kvality v reálném čase.

Závěr

Převedení USP stanovení benzokainu na Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8 kolony vykázalo významné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel při zachování shody se systémovými kritérii USP. Metoda poskytuje laboratořím možnost zvýšit produktivitu bez nutnosti rozsáhlé revalidace.

Reference

• USP Benzocaine Lozenge Method, United States Pharmacopeia 2020, 42(4), Rockville, MD
• USP General Chapter 621, USP 37-NF32, First Supplement