Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridges

Význam tématu

Odstranění nevolatilních solí před hmotnostní spektrometrií je klíčové pro analýzu bioterapeutik, zejména komplexních proteinů, jako jsou monoklonální protilátky. Soli mohou významně potlačit signál MS, zvyšovat údržbu přístroje a snižovat kvalitu dat. Online reverzní fáze desalting zajišťuje čistší spektra, vyšší spolehlivost výsledků a efektivnější provoz analytických laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Tento příspěvek představuje Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridge, speciální reverzněfázové kolony určené k rychlému a efektivnímu odstranění solí přímo v LC-MS workflow. Popisuje jejich využití jak samostatně na libovolném LC systému, tak kombinaci s Agilent 1290 Infinity II 2D-LC pro dvoustupňový postup po první dimenzi separace (IEX, SEC nebo afinitní chromatografie).

Použitá metodika a instrumentace

Pro odstranění solí byla použita cartridge stylizovaná kolona s polymerními částicemi 10 µm a póry 1000 Å, stabilní v rozsahu pH 2–13. Mobilní fáze obsahovaly 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě (A) a 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu (B). Průtok byl nastaven na 0,4 mL/min a gradient se pohyboval od 5 % do 80 % fáze B. Desalting probíhal on-line mezi první a druhou dimenzí separace, kdy bylo eluční médium obohaceno o analyty bez solí.

Hlavní výsledky a diskuse

Implementace AdvanceBio Desalting-RP cartridge významně zlepšila kvalitu MS dat:

• Odstranění signálového potlačení vzorků obsahujících nevolatilní soli.
• Vyšší intenzita chromatografických špiček při měření srovnání s neodsoleným vzorkem.
• Vysoká opakovatelnost mezi vícenásobnými injekcemi potvrzená stabilními EIC a m/z profily.

Tyto výsledky potvrzují, že cartridges umožňují konzistentní online desalting bez negativního vlivu na separaci cílových biomolekul.

Přínosy a praktické využití metody

AdvanceBio Desalting-RP přináší následující výhody:

• Možnost MS detekce po IEX, SEC nebo afinitní chromatografii bez dodatečné offline přípravy.
• Zkrácení doby analýzy díky online desaltingu.
• Snížení prostojů a údržby hmotnostního spektrometru.
• Zvýšení důvěry v data díky lepší reproducibilitě a citlivosti.

Budoucí trendy a možnosti využití

Online reverzní fáze desalting se dále rozvíjí v několika směrech:

• Integrace s automatizovanými 2D-LC systémy pro vysokopropustné screeningové studie.
• Rozšíření aplikací na různé třídy biomolekul, včetně oligonukleotidů a glykoproteinů.
• Využití v pokročilých workflow pro glykanovou analýzu a mapování peptidů.
• Zavádění modulárních pluginů pro rychlé přepínání mezi různými chromatografickými režimy.

Závěr

Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridge představují efektivní a spolehlivou metodu pro online odstranění solí v LC-MS analýze bioterapeutik. Díky jednoduché integraci do standardních LC systémů a Agilent 2D-LC platformy umožňují rychlejší analýzy, zlepšenou kvalitu dat a snížení údržbových nároků MS přístrojů.

Použitá instrumentace

• AdvanceBio Desalting-RP cartridge 2.1 × 12,5 mm (PN PL1612-1102)
• Opakovatelný držák cartridge (PN 820999-901)
• Agilent 1290 Infinity II 2D-LC systém
• QTOF hmotnostní spektrometrie
• LC injektor a pumpy pro gradientní eluci