Application of Agilent AdvanceBio Desalting-RP Cartridges for LC/MS Analysis of mAbs

Význam tématu

Odstranění solí a detergentů z roztoků monoklonálních protilátek před LC/MS analýzou je klíčové pro zajištění kvalitních hmotnostních spekter bez potlačení signálu. Efektivní desalting umožňuje přesnou charakterizaci heterogenity mAbs a zvyšuje citlivost a reprodukovatelnost výsledků v biofarmaceutickém výzkumu a kontrole kvality.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo otestovat novou Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridgi pro jedno- a dvourozměrné LC/MS analýzy mAbs. Studie zahrnovala:

• online desalting v jednorozměrném (1D) režimu,
• multidimenzionální separaci (IEX → RP) s heart-cuttingem ve dvourozměrném (2D) uspořádání,
• vyhodnocení účinnosti odstranění solí, reproducibility a kvality MS signálu.

Použitá instrumentace

Hlavní přístrojové vybavení:

• LC/MS systém Agilent 1290 Infinity 2D-LC/MS s Q-TOF MS detektorem
• Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridge, 2.1 × 12.5 mm, 10 μm, 1000 Å (p/n PL1612-1102)
• Ion exchange kolona Agilent Bio MAb NP5, 4.6 × 250 mm, PEEK (p/n 5190-2407)
• Solventa: 0.1% formamidová kyselina (FA), 0.1% FA v acetonitrilu, roztoky NaCl a NaH2PO4 pro IEX
• MS parametry: teplota plynu 350 °C, sheath gas 400 °C, flow 8 L/min, Vcap 5000 V, fragmentor 200

Hlavní výsledky a diskuse

1) Jednorozměrné 1D-LC/MS:
bez cartridže dochází k potlačení signálu solí, s cartridží se získá čisté a intenzivní spektrum.

2) Vliv koncentrace NaCl na glykoformy:
i při 150 a 300 mM NaCl zůstává relativní kvantifikace G0F, G1F a G2F konzistentní, pouze se objeví Na-addukty.

3) Dvourozměrné 2D-LC/MS s heart-cuttingem:
vybraný hlavní vrchol z IEX je přesměrován na Desalting-RP cartridge, odkud je do MS dodán čistý protein, což potvrzují TIC, m/z spektrum a dekonvoluce.

4) Reprodukovatelnost:
tři opakované injekce v 2D režimu vykazují téměř identické EIC a m/z profily, dokládající vysokou injekce-injekce repeteabilitu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• online odstranění solí bez offline kroků,
• integraci s multidimenzionálními chromatografickými režimy,
• rychlý a reprodukovatelný přenos vzorků do MS,
• vysokou kvalitu hmotnostních spekter i ze solí znečištěných vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Advances v oblasti desaltingu a multidimenzionální LC/MS budou směřovat k:

• plně automatizovaným online pracovním postupům pro vysoko-propustný screening mAbs,
• rozšiřování heart-cuttingových přístupů na další třídící režimy (affinity, HILIC),
• aplikacím v charakterizaci biosimilars a přípravcích s komplexními modifikacemi,
• nasazení ve výrobním QA/QC a regulovaných laboratořích.

Závěr

Agilent AdvanceBio Desalting-RP cartridge prokázala konzistentní a vysoce účinné odstranění solí u LC-separated mAbs před MS analýzou. Metoda zvyšuje kvalitu dat, redukuje potlačení signálu a umožňuje spolehlivou charakterizaci mAbs v jedno- i dvourozměrných LC/MS režimech.