WhereDo I Go from Here: Updating Old HPLC Methods

Význam tématu

Úprava starých HPLC metod je klíčová pro zvýšení efektivity chromatografických analýz a plné využití pokročilých technologií. Moderní sloupce s částicemi SPP a UHPLC systémy umožňují zkrácení doby analýzy, úsporu organických rozpouštědel a zlepšení rozlišení, tvaru piků a reprodukovatelnosti.

Cíle a přehled studie

Studie se zabývá stanovením vhodného okamžiku pro aktualizaci metod, analýzou isokratických a gradientních režimů, přenositelností mezi různými produkty a optimalizací parametrů jako velikost částic, délka a průměr kolony.

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent HPLC a UHPLC systémy (Agilent 1200, 1260, 1290 Infinity II)
• Kolonové chemie ZORBAX Eclipse Plus a InfinityLab Poroshell 120 s částicemi 4 µm, 2,7 µm a 1,8 µm
• Diode array detektory (DAD) pro UV detekci
• Isokratické a gradientní eluce, výpočty teoretických plat, rozlišení a přenositelnosti metod

Hlavní výsledky a diskuse

• Zmenšení částic a zkrácení sloupců vedlo ke zvýšení počtu teoretických plat až o 80 % a ke zkrácení doby analýzy až o 60 %
• Při zachování ekvivalentní lineární rychlosti mobilní fáze je možná přímá škálovatelnost mezi různými průměry kolony
• Úprava vstřikovaného objemu a průtoku zajišťuje stejnou citlivost i na úzkých kolónách
• Metody lze bez značné revalidace přenášet mezi generacemi Agilent systémů díky sladěným kolonovým chemiím

Přínosy a praktické využití metody

Aktualizované metody zvyšují laboratorní produktivitu snížením spotřeby rozpouštědel, zkrácením doby analýz a umožňují hladký přechod mezi HPLC a UHPLC. Jsou vhodné pro farmaceutické analýzy, environmentální monitoring, potravinářské zkoušky a průmyslovou kontrolu kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace kolón (micro a nano kolony)
• Širší integrace s hmotnostní spektrometrií a rychlou MS/MS
• Automatizace a digitální řízení metod pomocí pokročilého softwaru
• Green chemistry principy se snížením objemů mobilní fáze a použitím ekologičtějších rozpouštědel

Závěr

Modernizace stávajících HPLC metod nasazením menších částic, kratších a užších kolón a využitím současné instrumentace přináší výrazné zlepšení efektivity, kvality dat a snížení nákladů. Díky kompatibilním chemiím lze metody jednoduše přenášet mezi systémy a adaptovat pro různé aplikace v analytické chemii.