Updating Old Methods:Is the Gain Worth the Pain? - Becoming a Better Chromatographer HPLC educational webinar

Význam tématu

V oblasti kapalinové chromatografie je trvalá potřeba zkracovat analýzy, zvyšovat rozlišení a citlivost metod a zároveň šetřit čas, spotřebu rozpouštědel a náklady na likvidaci. Přechod od tradičních kolon s úplně porézními částicemi (TPP) na moderní kratší a užší kolony s povrchově pórovitými částicemi (SPP) otevírá cestu k rychlejšímu zpracování vzorků a vyšší laboratorní propustnosti bez nutnosti rozsáhlých investic do nových přístrojů.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje přístup k aktualizaci stávajících HPLC metod využitím Agilent InfinityLab Poroshell 120 kolon různých velikostí částic (1,9 µm, 2,7 µm a 4 µm) a chemických fází. Cílem je demonstrovat, jak lze snížit dobu analýzy, zvýšit počet teoretických desek (N), udržet nebo zlepšit rozlišení (Rs) a současně omezit spotřebu rozpouštědel.

Použitá metodika a instrumentace

Pro porovnání byly použity následující chromatografické systémy:

• Agilent 1260 Infinity HPLC uhlazený DAD detektorem (UV 220–240 nm).
• Kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, SB-C18, HPH-C18, HILIC a chiral-CF/Chiral-V na povrchově pórovitých částicích ve velikostech 1,9; 2,7; 4 µm.
• Standardní mobilní fáze: voda/formic acid, acetonitril a methanol v gradientních i izokratických režimech.
• Řízení teploty kolony (30–40 °C) a optimalizace průtoku podle Van Deemterovy křivky.

Hlavní výsledky a diskuse

V experimentálních příkladech přechod z 5µm TPP na 2,7µm SPP kolony zkrátil analýzu ibuprofenu z 18 na 5,2 min při zachování Rs>12, zlepšil citlivost o více než 40 % (S/N) a snížil tlak v systému. Metody pro naproxen prokázaly zvýšení počtu desek až o 98 % a zachování metodické shody s USP <621>. Gradientní přenosy a úpravy průtoku i injekčního objemu byly provedeny podle teoretických vztahů (proporcionální změny délky kolony, objemu a gradientní doby) s udržením retenčního faktoru k*. Superficially porous kolony navíc umožnily robustní provoz za vysokého pH (HPH-C18), bez ztráty rozlišení po 2000 injekcích.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledky potvrzují, že moderní superficially porous SPP kolony výrazně zvyšují laboratorní produktivitu a propustnost, aniž by byla nutná výměna stávajících HPLC přístrojů. Metoda se uplatní v QA/QC laboratořích farmacie, potravinářství i životního prostředí, kde lze snížit dobu stanovení a spotřebu rohpodně, zachovat vysokou opakovatelnost a dosáhnout lepšího rozlišení komplexních směsí, včetně aminokyselinových, fenolických a chirálních sloučenin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj bude směřovat k ještě menším průměrům částic a kolonám kompatibilním s ultrarychlou LC (UHPLC), rozšíření nabídky vysokopH stabilních fází pro alkalické iontově párové aplikace a hybridnímu návrhu povrchových částic umožňujícímu simultánní rozdělení polárních i nepolárních analyzů. Významný je také rozvoj chiralních superficially porous fází a HILIC kolon pro lepší separaci vysoce polárních sloučenin.

Závěr

Přechod na Agilent InfinityLab Poroshell 120 kolony představuje efektivní cestu ke zkrácení doby analýzy, úspoře rozpouštědel a zvýšení rozlišení bez zásadních investic do instrumentace. Metodické přenosy v souladu s USP <621> jsou dosažitelné jednoduchými proporčními úpravami parametrů a poskytují robustní a vysoce citlivé analytické metody.