How Do I Determine the Best Chromatography for my Sample

Význam tématu

Liquidní chromatografie umožňuje selektivní separaci široké škály organických i biologických sloučenin. Volba optimální metody a typu kolony zásadně ovlivňuje kvalitu rozlišení, citlivost a efektivitu analýzy. S rostoucí komplexitou vzorků v environmentálních, potravinářských, farmaceutických i biotechnologických aplikacích se stává rozhodnutí o chromatografickém režimu, částicové technologii a chemii stacionární fáze klíčovým prvkem analytického workflow.

Cíle a přehled článku

Článek nabízí systematický přístup k výběru chromatografie podle typu vzorku a analytických požadavků. Posuzuje různé režimy LC, porovnává tradiční plně pórové částice a moderní povrchově pórové kolony Poroshell 120, představuje širší škálu chemických modifikací stacionárních fází včetně RP C18, SB, HPH, Bonus RP, CS C18, HILIC a chirálních kolon. Dále rozebírá přenos metod mezi produkty, selektivitu, vliv optimalizace parametrů na rozlišení a roli vhodné instrumentace.

Použitá metodika a instrumentace

• Porovnání plně pórových a povrchově pórových částic s ohledem na účinnost, zpětný tlak a životnost kolony
• Testy různých velikostí částic (1,9 μm, 2,7 μm a 4 μm) na systémech Agilent 1290 Infinity II, 1260 Infinity II a 1220 Infinity II
• Vyhodnocení řady stacionárních fází pro odlišnou selektivitu a pH stabilitu
• Aplikace HILIC a chirálních separací s detekcí DAD, ELSD a LC/MS
• Analýza dopadů objemu spojovacích kapilár a objemu flow cell na rozlišení a tvar špiček

Hlavní výsledky a diskuse

• Povrchově pórové kolony Poroshell 120 dosahují podobné či vyšší účinnosti než sub-2 μm plně pórové částice při nižším tlaku
• Vhodná velikost částic 2,7 μm představuje kompromis mezi rychlostí analýzy a kompatibilitou s HPLC systémy
• Alternativní chemie Bonus RP a CS C18 dramaticky zlepšují separaci obtížně rozlišitelných sloučenin
• HILIC kolony účinně separují vysoce polární látky včetně sacharidů
• Chirální kolony umožňují rozlišení enantiomerů s vysokou citlivostí
• Správná volba kapilár a optimalizace detekčního flow cell objemu je kritická pro zachování vysokého rozlišení

Přínosy a praktické využití metody

Navržený postup zjednodušuje výběr kolony podle požadavků na účinnost, selektivitu, pH stabilitu a kapacitu vzorku. Umožňuje zvýšit propustnost laboratoří, zkrátit dobu analýzy a přenášet metody mezi HPLC a UHPLC systémy při zachování robustnosti a reprodukovatelnosti výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozvoj povrchově pórových technologií a inovativních povrchových modifikací
• Integrace UHPLC s vysokorozlišenou hmotnostní spektrometrií a automatizovanými platformami
• Nasazení umělé inteligence pro automatizovaný výběr optimálních metod a chemie kolony
• Ekologické přístupy ke snižování spotřeby organických rozpouštědel
• Rozšíření HILIC a chirálních aplikací v multiomických studiích

Závěr

Systematický výběr chromatografie kombinuje znalost vzorku, cíle analýzy, částicovou technologii, chemii stacionární fáze a optimalizaci instrumentace. Moderní povrchově pórové kolony Poroshell 120 v široké nabídce chemických modifikací významně rozšiřují možnosti rozlišení a efektivity v analytické chemii.

Reference

• Agilent Application Note 5990-5572EN
• Agilent Technical Overview 5990-6588EN
• Agilent Brochure 5991-8750EN
• Agilent Selection Guide 5994-1982EN
• Agilent HILIC Development Guide 5991-9271EN