Method Makeover: Updating older HPLC methods

Význam tématu

Aktualizace starších HPLC metod umožňuje dosáhnout rychlejších analýz, lepší reprodukovatelnosti a citlivosti při současném snížení spotřeby rozpouštědel a provozních nákladů. Moderní sloupce a částice zvyšují produktivitu laboratoře a usnadňují přenos metod mezi různými systémy.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje postupy pro modernizaci isokratických a gradientních HPLC metod podle požadavků USP <621>. Je představen přehled vhodných sloupců (menší částice, různé průměry, chemistrie), demonstrace přenosu metod na modelových lécích (amlodipin, diphenhydramin, iohexol) a zásady pro úpravy parametrů (délka sloupce, průtok, gradientní profil, objem injekce).

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent HPLC a UHPLC systémy kompatibilní s InfinityLab a ZORBAX sloupci
• Sloupce Poroshell 120 (SPP) a ZORBAX Eclipse / SB (TPP) s velikostí částic 1,8–5 μm a vnitřními průměry 2,1–4,6 mm
• Detekce Diodovým polem (DAD) a UV detektorem
• Dodržení pravidel pro přenos metod podle USP <621> (L/dp, N, F, V, tG)

Hlavní výsledky a diskuse

Modelové přenosy ukázaly:

• Amlodipin: analýza zkrácena z ~23 min na 3,1 min (−85 %), spotřeba eluční fáze z 13,8 mL na 2,5 mL
• Diphenhydramin HCl: zkrácení z 37,1 min na 12,3 min (−66 %), spotřeba eluční fáze snížena o 82 %
• Iohexol: zkrácení z 60 min na 8,6 min (−86 %), úspora eluční fáze až 92 %
• Všechny přenosy splnily systémové vhodnosti (rozlišení, symetrie, RSD)

Přínosy a praktické využití metody

Modernizované metody zvyšují laboratorní průchodnost, šetří čas i reagencie, usnadňují soulady s kompendiálními monografiemi a umožňují využití současných HPLC/UHPLC přístrojů bez nákladné validace nových metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření superficially porous částic a miniaturizovaných sloupců pro ultrarychlé analýzy
• Implementace automatizovaných návrhů metod (např. Agilent HPLC Advisor App)
• Propojení s elektronickými monografiemi a on-line aktualizacemi USP
• Ekologická chromatografie využívající menší objemy a zelenější mobilní fáze

Závěr

Aktualizace HPLC metod podle harmonizovaného USP <621> přináší významné zlepšení efektivity, snížení nákladů a zachování analytické kvality bez nutnosti plné revalidace. Tento přístup podporuje udržitelnost a rychlou adaptaci v prostředí farmaceutických a průmyslových laboratoří.

Reference

• Powell M. Method Makeover: Updating older HPLC methods. Agilent Technologies, 2024.
• United States Pharmacopeia General Chapter <621> Chromatography.