Development of Profiling Method for Major Lipids in Blood by Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Profilování hlavních lipidů v krvi poskytuje důležité informace o metabolických změnách spojených s řadou onemocnění, včetně kardiovaskulárních chorob a metabolického syndromu. Detailní analýza fosfolipidů, triacylglycerolů, cholesteryl esterů a volných mastných kyselin může odhalit biomarkery a podpořit vývoj nových diagnostických a terapeutických postupů.

Cíle a přehled studie

Autoři si kladli za cíl rozšířit existující metodiku MRM profilování založenou na LCMS-8060 tak, aby zahrnovala hlavní třídy lipidů v krvi. Využili ultra rychlého kvadrupólového hmotnostního spektrometru se schopností přepínání polarity během 5 ms a nastavili přibližně 360 MRM přechodů pro identifikaci kolem 100 lipidů.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC systém Nexera s kolonkou Phenomenex Kinetex C8 (150 × 2,1 mm, 2,6 μm), teplota 50 °C, flow 0,4 mL/min
• Mobilní fáze A: 20 mM formiát amonný ve vodě, B: acetonitril/2-propanol 50:50 (v/v)
• MS detekce na Shimadzu LCMS-8060, ESI pozitivní/negativní, MRM režim, přepínání polarity 5 ms
• Nastaveny parametry: nebulizační plyn 3,0 L/min, vysoušecí plyn 10,0 L/min, temperování 250–400 °C, CID tlak 270 kPa, dwell/pauza 3/1 ms
• Příprava vzorku: 5 μL lidské krve extrahováno 500 μL metanolu s 0,1 % kyseliny mravenčí, 1 μL supernatantu injikováno (ekvivalent 10 nL krve)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila identifikovat přibližně 51 fosfolipidů, 26 triacylglycerolů, 11 cholesteryl esterů, CE hydroperoxidy, volné mastné kyseliny a volný cholesterol. Analýza trvala 20 minut při jedné injekci extraktu z 10 nL krve. Kombinace mastných kyselin byla uspokojivě určena pro 51 PL a 26 TG.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální potřebné množství krve (5 μL) a rychlá příprava vzorku
• Komplexní profilování lipidů jedním analytickým během
• Možnost nasazení v preklinických a klinických studiích, QA/QC laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření lipidomických metod o nově objevené lipidové třídy a integrace s jinými omickými technologiemi. Vývoj softwarových nástrojů pro automatizaci MRM přechodů a zpracování dat podpoří vysokopropustné analýzy.

Závěr

Vyvinutá MRM metoda na LCMS-8060 umožňuje rychlé a citlivé profilování hlavních lipidů z minimálního objemu lidské krve. Metoda přináší široké možnosti aplikace v biomedicínském výzkumu a klinické diagnostice.