Single Digit Reproducibility Using ProteinWorks eXpress Digest Kits

Význam tématu

Analýza proteinů pomocí LC–MS je klíčová pro bioanalytické a klinické aplikace, avšak vzorková příprava představuje hlavní zdroj variability. Standardizované kity usnadňují práci s komplexními protokoly, snižují nároky na odborné znalosti a umožňují reprodukovatelné výsledky napříč laboratořemi, analytiky i dny.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie je ověřit reprodukovatelnost přípravy vzorků a kvantifikace proteinu v biologické matrici za použití ProteinWorks eXpress Digest Kits. Testována byla intra- a inter-kit variabilita na pěti unikátních šaržích sad, dvou analyticích a ve dvou dnech, při šesti technických replikátech.

Použitá metodika a instrumentace

Pro kvantifikaci monoklonální protilátky bevacizumabu (Avastin) v plazmě byly použity dvě varianty:

• Direct Digest Kit pro přímou digesci celkové plazmy (p/n 176003688).
• Digest Kit pro digesci afinitně purifikované plazmy (p/n 176003689).

Postup je založen na pre-vážených, stopově sledovatelných činidlech a standardním protokolu pro tryptickou digesci a LC–MS analýzu surrogátních peptidů.

Instrumentace:

• Kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií (LC–MS).

Hlavní výsledky a diskuse

Reprodukovatelnost byla posouzena koeficientem variačním (% CV) u podpůrných i jedinečných peptidů bevacizumabu.

• Intra-kit variabilita: průměrné % CV ≤ 10 % u obou typů sad.
• Inter-kit variabilita: průměrné % CV ≤ 10 % napříč pěti šaržemi.
• Mezi analytiky a mezi dny: naměřené koncentrace v rámci 10 % odchylky, % CV ≤ 15 % u šesti replikát.

Tato data potvrzují schopnost kited workflow dosahovat jednotných a přesných výsledků i při minimální praxi uživatele.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace kitů ProteinWorks eXpress:

• Výrazně zkracuje čas přípravy vzorků a eliminuje zdroje variability.
• Zajišťuje konzistentní kvalitu výsledků mezi laboratořemi a operátory.
• Snižuje potřebu rozsáhlého vývoje a ověřování protokolů pro každý nový projekt.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření standardizovaných kateder pro další bioanalytické aplikace, automatizace přípravného procesu a integrace s vyššími průtokovými systémy. V budoucnu mohou vzniknout kity pro nové třídy biologických makromolekul a multi-omics analýzy.

Závěr

Studie ukazuje, že využití ProteinWorks eXpress Digest Kits umožňuje dosáhnout jednociferné variability a spolehlivých výsledků v proteinové kvantifikaci pomocí LC–MS. Standardizované workflow přináší vyšší účinnost, snižuje chybovost a usnadňuje mezinárodní i mezilaboratorní srovnání dat.

Reference

Žádné externí bibliografické odkazy uvedeny nebyly.