Simple, Standardized, and Sensitive Quantification of Bevacizumab (Avastin) Using ProteinWorks eXpress Digest Kits

Význam tématu

Bevacizumab, klíčový monoklonální protilátkový lék, expiroval patent v roce 2020, což zvyšuje zájem o jeho bioanalytické metody zejména při vývoji biosimilárních produktů. Efektivní, citlivá a standardizovaná kvantifikace v biologických maticích je nezbytná pro výzkum a vývoj, kde LC-MS přináší robustní alternativu k imunologickým metodám.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje uplatnění ProteinWorks eXpress Digest Kit pro rychlou a citlivou kvantifikaci bevacizumabu v krysí plasmě. Cílem bylo vyvinout univerzální, snadno přenositelný postup s minimální potřebou odborných zásahů pro přípravu vzorků a detekci na LC-MS.

Použitá metodika

Vzorky krysí plazmy (35 µL) prošly afinitní purifikací na Protein A agaróze, enzymatickou digescí pomocí eXpress Digest Kit a následným čistěním peptidů SPE. Analýza proběhla na UPLC systému s BEH C18 kolónou při 55 °C, gradientním elučním programu s 0,1 % formiové kyseliny ve vodě a acetonitrilu a detekcí v režimu MRM na Xevo TQ-S MS.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 (300 Å, 1,7 µm, 2,1×150 mm)
• ACQUITY UPLC System
• Xevo TQ-S Mass Spectrometer (ESI+)
• ProteinWorks eXpress Digest Kit
• ProteinWorks µElution SPE Clean-up Kit

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila detekovat bevacizumab s dolní kvantifikační hranicí 100 ng/mL z pouhých 35 µL krysí plazmy. Primární signální peptid FTFSLDTSK vykázal linearitu přes 3,5 dekády s průměrnou přesností 100 % a nízkou variabilitou (%CV ≤ 7 %). Další měřené peptidy poskytují ověřovací data pro zvýšení spolehlivosti analýzy. Celková doba přípravy včetně afinitní purifikace byla pod 6 hodin.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchý protokol vhodný i pro méně zkušené pracovníky
• Minimální objem vzorku (35 µL)
• Rychlá příprava vzorku (< 6 hodin) s vysokou citlivostí a přesností
• Univerzální postup přenositelný mezi laboratořemi

Budoucí trendy a možnosti využití

Standardizované LC-MS postupy pro kvantifikaci monoklonálních protilátek budou nadále rozšiřovány a optimalizovány pro multiplexní analýzu. Automatizace přípravy vzorků a zvýšení throughput umožní rychlejší vývoj biosimilárních léčiv a efektivní monitoring v klinických studiích.

Závěr

ProteinWorks eXpress Digest Kit poskytuje rychlý, citlivý a snadno přenositelný postup pro kvantifikaci bevacizumabu v krevní plazmě s vynikající linearitou, přesností a reprodukovatelností bez nutnosti rozsáhlé optimalizace metodiky.

Reference

1. McKinsey and Company; Data Source: Evaluate Pharma, US Patent Expiration Dates.
2. Medicines in Development: Biologics, PhRMA, 2013.
3. Avastin product insert, Roche.
4. Genentech site for Health Care Professionals, www.avastin-hcp.com.
5. Emily Bergsland, Maura N. Dickler, The Oncologist, June 2004, vol. 9 Supplement 1, 36–42.