A Generic Kit-Based Approach for Quantifying Monoclonal Antibody Drugs Through Direct Digestion of Discovery Study Samples

Význam tématu

V poslední dekádě roste význam biologických léčiv založených na monoklonálních protilátkách. S expirovanými patenty z let 2012–2020 se zvýšil tlak na spolehlivou kvantifikaci těchto proteinů v bioanalytických laboratořích. LC-MS postupy postupně nahrazují imunoanalytické metody díky lepší reproducibilitě, širšímu dynamickému rozsahu a možnosti standardizace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit univerzální kittovou metodu pro přímou digesci a kvantifikaci čtyř léčivých mAb (infliximab, bevacizumab, trastuzumab, adalimumab) v lidské plazmě. Autoři demonstrovali, že jeden protokol bez individuální optimalizace umožňuje získat data tentýž den.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků a měření byly nasazeny následující komponenty:

• ProteinWorks eXpress Direct Digest Kit pro tryptickou digesci 35 μl plazmy
• ProteinWorks μElution SPE Clean-up Kit pro extrakci peptidů
• ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 kolona (2,1×150 mm, 1,7 μm) při 55 °C
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, fáze B: 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu, gradient 0–8 min od 100 % A do 90 % B
• Detekce na Xevo TQ-S Mass Spectrometer s ESI+ v režimu MRM

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje kvantifikačních limitů 0,25–2,5 μg/ml, linearita standardních křivek pokrývá 3,5 až 4 dekády s koeficientem determinace r2≥0,996. Průměrné odchylky přesnosti se pohybovaly kolem 95–105 %, mezipokusové CV byly pod 15 %, často pod 5 %. Celkový čas přípravy včetně digesce a SPE činí pouhé 3–4 hodiny.

Přínosy a praktické využití metody

Standardizovaný kitový přístup přináší:

• Výrazné zkrácení doby přípravy vzorků
• Eliminaci časově náročného optimalizování jednotlivých kroků
• Vysokou reprodukovatelnost mezi dávkami a laboratořemi
• Možnost rychlého nasazení v raných fázích výzkumu a vývoje

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření kittových postupů na další biologická léčiva a biomarkery, integrace do automatizovaných high-throughput platforem a rozvoj metod pro multiplexní kvantifikaci více mAb v jednom běhu. Dále lze očekávat zdokonalení citlivosti a rozšíření do klinických studií.

Závěr

Přímá digesce plazmy pomocí ProteinWorks eXpress Direct Digest Kit se ukázala jako účinná, rychlá a univerzální pro kvantifikaci klíčových monoklonálních protilátek. Metoda splňuje běžné farmaceutické validační požadavky a umožňuje včasné rozhodování v rámci discovery studií.

Reference

1. Dalzell, Managed Care, October 2013
2. McKinsey and Company; Data Source: Evaluate Pharma, US Patent Expiration Dates
3. FDA Guidance for Industry for Bioanalytical Method Validation, CDER