A Quantitative UPLC-MS/MS Research Method for the Measurement of Acetaminophen and 5 Metabolites in Plasma

Význam tématu

Výzkum hladin acetaminofenu a jeho metabolitů je klíčový pro pochopení farmakokinetiky a toxikologie tohoto hojně používaného analgetika.

Cíle a přehled studie / článku

V článku je představen validovaný UPLC-MS/MS postup pro kvantifikaci acetaminofenu a pěti metabolitů v lidské i zvířecí plazmě.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorků: precipitace proteinů methanolem, injekční objem 2 µl.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC HSS C18 2.1×100 mm, 1.8 µm, teplota 40 °C, gradientní eluce (7,5 min), mobilní fáze voda/FA a methanol/FA.
• Hmotnostní spektrometrie: Xevo TQ-S, ESI+ v režimu MRM, optimalizované přechody, software MassLynx a TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografie zajišťuje rozlišení metabolitů od silně polárních konjugátů až po lipofilní glutathionové produkty s celkovou dobou analýzy 7,5 min.
• Kalibrační křivky vykazují linearitu r2 > 0,99.
• Preciznost a přesnost (intra/inter-batch) jsou v mezích FDA (CV ≤15 %, ≤20 % pro LLOQ).
• Selektivita a specifita potvrzeny nízkými maticemi interferencí; recovery 89–96 %; matrix effects ≤ ±14 %.
• Aplikace na krysí plazmu po dávkách 500 a 1500 mg/kg odhaluje PK profily konjugátů s nízkými hladinami GSH-odvozených metabolitů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda vyžaduje pouze 5 µl plazmy, nabízí vysokou citlivost v ng/ml, robustnost a rychlý průchod vzorků. Vhodná pro preklinické a klinické farmakokinetické studie, toxikologii i QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu analýzy o další fázové II metabolity.
• Integrace vysoce přesných hmotnostních spektrometrů pro strukturální charakterizaci.
• Automatizace přípravy vzorků a miniaturizace metodiky.
• Napojení na PK/PD modelování a terapeutický monitoring.

Závěr

Popsaná UPLC-MS/MS metoda poskytuje rychlé, citlivé a spolehlivé stanovení acetaminofenu a jeho hlavních metabolitů v malých objemech plazmy podle FDA standardů.

Reference

1. den Braver MW et al. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017;1046:185–194.
2. Cook SF et al. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2015;1007.
3. FDA. Bioanalytical Method Validation. 2001.
4. FDA. Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation. Draft.