A Novel Extraction Procedure Using Micro Elution Plates for the Estimation of Docetaxel Using UPLC and ACQUITY TQD

Význam tématu

Docetaxel je klinicky významný protinádorový přípravek ze skupiny taxanů, široce používaný v léčbě různých typů rakoviny. Kvantifikace jeho koncentrace v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické studie, terapeutický monitoring a vývoj nových lékových formulací. Vysoké navázání na bílkoviny a nízké hladiny v biologických vzorcích představují analytickou výzvu, kterou je třeba spolehlivě řešit.

Cíle a přehled studie

Tato studie předkládá novou extrakční proceduru využívající mikro-eluce Oasis HLB destiček spojenou s chromatografickou analýzou na systému ACQUITY UPLC a detekcí na hmotnostním spektrometru ACQUITY TQD. Cílem bylo dosáhnout vysoké citlivosti (LLOQ 200 pg/mL), specifity, reprodukovatelnosti a propustnosti vzorků.

Použitá metodika

Vzorky plazmy (300 µL) byly naředěny vodou, odstředěny a aplikovány na mikro-elutační SPE destičky Oasis HLB. Po promytí vodou a organo-aqueous fází byly analyty eluovány a injektovány přímo do UPLC.
Chromatografie probíhala na sloupci ACQUITY UPLC BEH C8 (1,7 μm, 2,1 x 100 mm) při 40 °C s gradientem od 70 % vodného pufru k 90 % organické fáze. Mobilní fáze: vodný pufr/organická fáze, průtok 0,3 mL/min, injekční objem 20 µL.
MS/MS detekce byla provozována v ESI pozitivním režimu s MRM přechody 808,7→226,3 a 808,7→282,3.

Použitá instrumentace

• UPLC systém: ACQUITY UPLC
• Chromatografický sloupec: ACQUITY UPLC BEH C8, 1,7 μm, 2,1 x 100 mm
• Detektor: ACQUITY TQD
• Extrakční destičky: Oasis HLB Micro-elution Plates

Hlavní výsledky a diskuse

Docetaxel se eluoval při retenčním čase 2,67 min s šířkou vrcholu 10 s. Průměrný poměr signál/šum (S/N) pro LLOQ (200 pg/mL) byl ~196. Lineární rozsah kalibrace 0,2–100 ng/mL vykázal r2 = 0,9994 a zpětně vypočtené koncentrace byly v rámci ±12 % nominální hodnoty. Průměrná obnova analytu činila přibližně 48 % napříč čtyřmi QC úrovněmi, s %CV < 10 % a inter-batch přesností > 93 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda vyžaduje nízký objem plazmy, minimalizuje matriční efekt a umožňuje vysokou propustnost vzorků. Vysoká citlivost a reprodukovatelnost podporují aplikace v preklinických a klinických bioanalytických studiích, stejně jako v QA/QC farmaceutických výrobách.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace a automatizace extrakce pro ultra vysokou propustnost.
• Integrace s vysokorozlišujícími hmotnostními spektrometry pro širší spektrální identifikaci.
• Multiplexní analýzy více léčiv současně pro komplexní farmakokinetické studie.
• Využití v personalizované medicíně a biomarkerových panelech.

Závěr

Navržená mikro-elutační SPE procedura v kombinaci s ACQUITY UPLC a detektorem TQD poskytuje robustní, citlivou a vysoce propustnou metodu pro kvantifikaci docetaxelu v lidské plazmě.