Simultaneous determination of four immunosuppressants in whole blood – A fast method on a Shimadzu tandem LCMS-8030 mass analyser

Význam tématu

Stanovení hladin imunosupresiv v celkové krvi představuje kritický nástroj pro optimalizaci léčby pacientů po transplantaci. Udržení koncentrace v terapeutickém rozmezí minimalizuje riziko nežádoucích účinků a zajišťuje dlouhodobou akceptaci graftu. Tradiční imunotesty často vykazují zkreslení způsobené cross-reaktivitou, proto se stále více prosazuje LC-MS/MS jako zlatý standard.

Cíle a přehled studie / článku

Publikace popisuje rychlou kit-based metodu pro simultánní detekci čtyř imunosupresiv (Cyklosporin A, Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus) v celkové krvi pomocí Shimadzu tandemového hmotnostního spektrometru LCMS-8030. Hlavním cílem bylo vyvinout spolehlivý, plně validovaný postup vhodný pro rutinní laboratorní provoz.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků sloužila komerčně dostupná testovací souprava Chromsystems. Postup zahrnoval:

• Krátkou proteinovou precipitaci z 100 µl krve
• Online trappingového předčištění pro odstranění matricových interferencí
• Chromatografii na Shimadzu LCMS-8030 s UFsweeper™ technologií pro minimalizaci cross-talk
• Detekci a kvalifikaci pomocí rychlého polarity switching (15 ms) a skenovací rychlostí až 15 000 u/s
• Software LabSolution pro řízení analýzy, integraci a vyhodnocení výsledků

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala excelentní linearitu v rozsahu:

• Cyklosporin A 25–900 µg/l (R>0,9997)
• Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus 2–50 µg/l (R>0,9991)

Limit kvantifikace se pohyboval pod 1 µg/l. Mezním přesnosti (CV) dosáhly hodnoty:

• Cyklosporin A CV 1,4 %
• Tacrolimus CV 5,2 %
• Sirolimus CV 9,4 %
• Everolimus CV 6,4 %

Docházelo k minimálním biasům v rámci 90–110 % a imprecision CV < 10 %. Stabilita kontrolních vzorků byla ověřena po dobu 14 dní s nepatrnými odchylkami. Porovnání s referenčními metodami (HPLC-MS/MS, imunotesty) pomocí Passing-Bablokovy regrese prokázalo shodu se sklony regresní přímky mezi 0,97–1,03.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlá doba analýzy (méně než 5 minut na vzorek) a vysoká reprodukovatelnost zkracují odezvu laboratoře na farmakoterapeutické rozhodnutí. Metoda umožňuje simultánní sledování čtyř klíčových imunosupresiv, což zjednodušuje workflow a snižuje náklady na materiál i pracovní sílu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření LC-MS/MS stanovení v klinické praxi, včetně:

• Automatizace přípravy vzorků a integrace s nemocničními laboratorními informačními systémy
• Multiparametrického sledování metabolitů imunosupresiv pro detailnější farmakokinetickou kontrolu
• Vývoje miniaturizovaných a plně řízených modulárních přístrojů pro pokladnicky orientované testování

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda na platformě Shimadzu LCMS-8030 poskytuje rychlé, spolehlivé a přesné stanovení imunosupresiv v celkové krvi. Díky vysoké citlivosti, linearitě a reprodukovatelnosti se jeví jako ideální řešení pro rutinní monitorování transplantovaných pacientů.

Reference

1. Vogeser M, Spöhrer U. Automated processing of whole blood samples for the determination of immunosuppressants by liquid chromatography tandem-mass spectrometry. Clin. Chem. Lab. Med. 2006;44(9):1126-1130.
2. Chromsystems application manual, MassTox® Immunsuppressiva, 2010.
3. Passing H, Bablok. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part I. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983;21(11):709-720.
4. Vogeser M, Seger C. A decade of HPLC-MS/MS in the routine clinical laboratory--goals for further developments. Clin. Biochem. 2008;41(9):649-662.