Measurement of immunosuppressants, Tacrolimus, Sirolimus, Everollmus and Cyclosporine A from whole blood using on-line SPE and LCMS-8030

Význam tématu

Imunosupresiva jako takrolimus, sirolimus, everolimus a cyklosporin A jsou klíčová pro potlačení imunitní odpovědi pacientů po transplantaci a v léčbě imunitně podmíněných onemocnění. Vzhledem k úzkému terapeutickému oknu je nezbytné jejich spolehlivé a rychlé kvantitativní stanovení z celkové krve.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo vyvinout a ověřit rychlou analytickou metodu kombinující on-line SPE a LC-MS/MS pro simultánní stanovení čtyř imunosupresivních látek přímo z krevního vzorku. Studie ukazuje plnou integraci předúpravy vzorku a chromatografické separace do jednoho pracovního postupu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro extrakci a separaci vzorků byla využita on-line SPE integrovaná v systému Nexera UHPLC s přepínacím ventilem load/inject. Analytické jádro tvořil trojský kvadrupól LCMS-8030 s pozitivní ESI a režimem MRM. Ke kvantifikaci a kvalifikaci každé látky byly optimalizovány dvě přechodové reakce. Pro přípravu standardů a kontrolních vzorků byl použit komerční testovací kit ClinMass® Complete Kit for Immunosuppressants in Whole Blood (RECIPE Chemicals + Instruments).

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatografické oddělení všech čtyř látek proběhlo za méně než dvě minuty při zachování dostatečného rozlišení. Kalibrační křivky vykazovaly výbornou linearitu (R2 > 0,99) v klinicky relevantních koncentracích: tacrolimus 1,34–23,5 µg/L; sirolimus 1,33–23,9 µg/L; everolimus 1,33–23,9 µg/L; cyklosporin A 24,9–1264 µg/L. On-line SPE zjednodušilo manipulaci s matricí celkové krve a minimalizovalo manuální přípravu.

Přínosy a praktické využití metody

Vývojová metoda nabízí vysokou propustnost, reprodukovatelnost a citlivost, což ji předurčuje pro rutinní terapeutický monitoring imunosupresiv v klinických laboratořích. Kombinace jednoduché předúpravy a rychlé analýzy umožňuje významné zkrácení doby odezvy na úpravu dávkování.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření multiplexního stanovení o další léky s úzkým terapeutickým oknem
• Automatizace a integrace do laboratorních informačních systémů
• Použití vysokorychlostních a vysoce rozlišujících hmotnostních spektrometrů
• Využití umělé inteligence pro pokročilou analýzu dat a prediktivní modelování

Závěr

Metoda založená na on-line SPE a LCMS-8030 prokázala vysokou citlivost, linearitu a rychlost analýzy imunosupresiv z celkové krve. Díky jednoduché implementaci a robustnosti je vhodná pro rutinní terapeutické monitorování.

Reference

• Anja Grüning, Dr. Lea Bonnington: Measurement of immunosuppressants Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus and Cyclosporine A from whole blood using on-line SPE and LCMS-8030, Shimadzu Corporation, First Edition: Sep 2013
• RECIPE Chemicals + Instruments GmbH: ClinMass® Complete Kit for Immunosuppressants in Whole Blood, MS1000