Fully automated analysis of immunosuppressant drugs in whole blood using stable isotope labeled internal standards

Význam tématu

Imunosupresiva vyžadují přesné monitorování plazmatické hladiny vzhledem k úzkému terapeutickému oknu. Správné dávkování snižuje riziko toxicity i odmítnutí transplantátu a optimalizuje léčbu pacientů po transplantaci.

Cíle a přehled studie

Studie představuje vývoj plně automatizované metody pro terapeutické monitorování imunosupresiv pomocí LC-MS/MS. Metoda kombinuje platformu CLAM-2000 a hmotnostní spektrometr LCMS-8050 s reagenční sadou DOSIMMUNE® pro měření cyklosporinu A, takrolimu, sirolimu a everolimu v celém krevním vzorku. Hlavním cílem bylo ověřit výkonnost, přesnost a porovnat výsledky s běžnými imunotesty.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrarychlá automatizovaná příprava vzorků na CLAM-2000 zahrnuje přímé dávkování hemolyzované krve, přidání stabilně značených interních standardů a extrakčního pufru. Analytická část využívá nástavec trap C8 a kolonu C18 DOSIMMUNE® při izokratickém průtoku 0,8 ml/min a teplotě 65 °C. Detekce probíhá v ESI+ režimu s MRM přechody pro cílové a referenční ionty každého analyta a odpovídajícího interního standardu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Kalibrační křivky vykázaly lineárnost (R²>0.998) v rozsahu 2–35 µg/l (takrolimus, sirolimus, everolimus) a 25–1800 µg/l (cyklosporin A).
• Přesnost měření dosáhla 90–110 %, opakovatelnost (CV) byla v přijatelném rozmezí.
• Porovnání s imunotesty ukázalo vynikající korelaci (R²=0.9567), s mírným pozitivním biasem u imunotestů.
• Automatizace přinesla zvýšení průtoku, snížení variability a rizika chyb operátora.

Přínosy a praktické využití metody

• Multiplexní analýza čtyř imunosupresiv v jednom běhu šetří čas i materiál.
• Vyšší specifita a citlivost oproti imunochemickým metodám.
• Redukce spotřeby reagentů a provozních nákladů díky automatizaci.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky na další skupiny léčiv a biomarkerů v terapeutickém monitorování.
• Integrace do laboratorních informačních systémů pro automatické vyhodnocení a reportování.
• Využití pokročilých algoritmů pro kontrolu kvality a optimalizaci workflow.

Závěr

Navržená plně automatizovaná LC-MS/MS metoda s použitím stabilně značených interních standardů nabízí spolehlivé, rychlé a ekonomické řešení pro terapeutické monitorování imunosupresiv ve vzorcích celkové krve. Vynikající shoda s konvenčními imunotesty potvrzuje klinickou použitelnost.

Reference

Dayot F., Hoeffler J.-F., Minohata T. DOSIMMUNE®: Fully automated analysis of immunosuppressant drugs in whole blood using stable isotope labeled internal standards. ALSACHIM SAS & Shimadzu Corporation; RUO.