LC/MS/MS High Sensitivity Bioanalytical Method: Atorvastatin Calcium in Human Plasma

Význam tématu

Atorvastatin Calcium patří mezi nejrozšířenější statiny používané k léčbě hypercholesterolémie a prevenci kardiovaskulárních onemocnění. Přesná a citlivá bioanalytická metoda pro stanovení jeho koncentrace v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické a bioekvivalenční studie, které ovlivňují vývoj a schvalování léčiv.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této aplikace je představit jednoduchý, rychlý a vysoce citlivý LC-MS/MS postup pro kvantifikaci atorvastatinu v lidské plazmě s minimální předúpravou vzorku. Studie demonstruje dosažení LLOQ na úrovni 10 pg/mL ve spiked vzorcích (40 pg/mL před precipitací) při využití LCMS-8060 a UHPLC Nexera X2.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy byly upraveny jednoduchou precipitací bílkovin pomocí směsi acetonitrilu a methanolu (1:1). Po centrifugaci a filtraci bylo supernatantních 450 µL analyzováno.

• UHPLC: Nexera X2, kolona Phenomenex Synergi 2.5 µm Polar-RP (100×2,0 mm), tok 0,3 mL/min, teplota 40 °C.
• Mobilní fáze: A) 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, B) 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu, gradient 10→95→10 % B v časech 0–1, 4–5,5 a 6–8 min.
• MS: Shimadzu LCMS-8060 s heated ESI v pozitivním módu, blok 400 °C, interface 350 °C, DL 250 °C, nitr v množství podle protokolu.
• MRM přechody: 559.25→440.25, 559.25→250.30 a 559.25→276.20.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah 10–5000 pg/mL (R² > 0,999). LLOQ ve spiked vzorcích dosáhlo S/N ≈ 10 při 10 pg/mL. Precision (RSD) a přesnost (accuracy) pro QC úrovně (10, 100, 5000 pg/mL) byly v rozmezí <15 % a 87–105 %. Recoveries se pohybovaly v rámci ±20 %, matrix efekt vykázal průměrné potlačení signálu kolem 36 % při absenci SPE.

Přínosy a praktické využití metody

Výhodou postupu je minimální předúprava vzorků bez potřeby SPE, což zvyšuje propustnost laboratoře a snižuje náklady. Metoda poskytuje dostatečnou citlivost pro farmakokinetické studie a monitorování expozice atorvastatinu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další optimalizace může zahrnovat automatizaci precipitace a integraci vysoce výkonných UHPLC kolón s cílem dalšího zvýšení citlivosti a propustnosti. Adaptace workflow na další statiny a jejich metabolity je perspektivní pro komplexní biomonitoring.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda na systému LCMS-8060 splňuje požadavky na citlivost, přesnost a reprodukovatelnost pro kvantifikaci atorvastatinu v lidské plazmě. Jednoduchý vzorkovací protokol bez SPE nabízí efektivní a nákladově úsporné řešení pro bioanalytické studie.

Reference

• Jiang Wang et al., Journal of Chromatography B, 983–984 (2015) 18–25
• Ying Zhou et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 83 (2013) 101–107
• Pankaj Partani et al., Journal of Pharmaceutical Analysis 4(1) (2014) 26–36