Simultaneous Analysis of Vitamins A and E in Serum by UPLC-MS/MS for Clinical Research

Význam tématu

Analýza vitaminů A a E v séru je zásadní pro sledování nutričního stavu a diagnostiku onemocnění spojených s nedostatkem těchto vitaminů. Rychlé a citlivé metody umožňují efektivní vyšetření s minimálním objemem vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout postup pro simultánní extrakci a kvantifikaci vitaminů A (retinol) a E (α-tokoferol) v lidském séru pomocí UPLC-MS/MS. Metoda byla navržena pro klinický výzkum s maximální rychlostí analýzy (3 min) a nízkou spotřebou vzorku i rozpouštědel.

Použitá metodika

Vzorek: 100 µL séra obohaceného stabilními izotopovými standardy (2H8-retinol, 2H6-tokoferol).
Precipitace: 450 µL ethanolu, 200 µL vody, centrifugace.
SPE: Oasis PRiME HLB µElution plate s proplachem 25 % acetonitrilu a elucí 2×65 µL acetonitrilu.
Chromatografie: ACQUITY UPLC HSS PFP 2,1×50 mm, 1,8 µm; mobilní fáze voda/formiát a methanol/formiát; gradient 3 min; průtok 0,4 mL/min.
MS/MS: ESI+, MRM režim; přechody 269,15→93,0 a 269,15→83,0 pro vitamin A, 431,4→165,1 a 431,4→83,0 pro vitamin E.

Použitá instrumentace

• UPLC: ACQUITY UPLC I-Class (FTN)
• Column: ACQUITY UPLC HSS PFP Column
• SPE: Oasis PRiME HLB 96-well µElution Plate
• MS/MS: Xevo TQD Tandem Quadrupole Mass Spectrometer
• Software: MassLynx, TargetLynx XS

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární rozsah: 28–4800 ng/mL pro vitamin A, 2–51,6 µg/mL pro vitamin E (r2 ≥ 0,997).
• LOQ: 50 ng/mL pro vitamin A, 1,1 µg/mL pro vitamin E s přesností ≤20 % CV.
• Reprodukovatelnost a celková preciznost ≤6,9 % CV (n=25).
• Žádné přenosy mezi injekcemi; 1:4 ředění vzorků u vysokých koncentrací s přesností 86–102 %.
• Odstranění >96 % fosfolipidů pomocí Oasis PRiME HLB.
• Dobrá shoda s UK NEQAS (Demingova regrese: r ≥ 0,91, bias ≤11 %).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou propustnost laboratoře s krátkou dobou analýzy a nízkou spotřebou séra. Minimalizace matrix efektů a interferencí zlepšuje spolehlivost výsledků v klinických studiích a QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace automatizovaných systémů pro dosažení ještě vyšší propustnosti.
• Rozšíření metody o další tuky rozpustné vitaminy a jejich metabolity.
• Použití vysoce výkonných hmotnostních detektorů pro multi-analyty ve více režimech.
• Optimalizace mikroextrakčních technik a miniaturizace spotřeby vzorku.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda umožňuje rychlou, citlivou a přesnou simultánní analýzu vitaminů A a E v lidském séru s minimální přípravou vzorku a vynikajícími analytickými parametry, vhodnou pro klinický výzkum.

Reference

• Michelle Wills, Gareth Hammond, Lisa Calton. Simultaneous Analysis of Vitamins A and E in Serum by UPLC-MS/MS for Clinical Research. Waters Corporation, 2019.