Nízko-průtokové UHPLC se s oblibou používají při proteomických, metabolomických a lipidomických studiích, kde hraje roli množství vzorku a nutnost sensitivní analýzy. S klesajícím průtokem mobilní fáze s analyty dochází v nano-elektrospreji k významnému navýšení výtěžnosti ionizace a tím i vlastní odezvy hmotnostně spektrometrické detekce. Vanquish Neo se stává volbou číslo jedna tam, kde chceme použít průměr kolon menší než 1 mm.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Prehled_HPLC_systemu_Thermo_Scientific_rady_Vanquish_d13a219fe3/Prehled-HPLC-systemu-Thermo-Scientific-rady-Vanquish.jpg" alt="Pragolab: Přehled HPLC systémů Thermo Scientific řady Vanquish"/>
<h3>HPLC systém</h3>
<h4>Rutinní analýzy <a href="https://lcms.cz/library?search=vanquish+core&amp;mainauthorItems=3">Vanquish Core</a></h4>
<ul>
<li>Vynikající pro standardní HPLC aplikace</li>
<li>Vynikající propustnost vzorků</li>
</ul>
<h3>UHPLC systémy</h3>
<h4>Low Flow <a href="https://lcms.cz/library?search=Vanquish+Neo&amp;mainauthorItems=3">Vanquish Neo</a></h4>
<ul>
<li>UHPLC systém pro všechny rozsahy Nano/Cap/Micro</li>
<li>Ideální pro LC MS aplikace</li>
</ul>
<h4>Flexibilní systém; vývoj metod <a href="https://lcms.cz/library?search=Vanquish+Flex&amp;mainauthorItems=3">Vanquish Flex</a></h4>
<ul>
<li>Vysokotlaké binární a nízkotlaké kvartérní gradienty</li>
<li>Dva režimy termosta tování</li>
<li>Bio kompatibilní</li>
<li>Integrace více detekčních možností</li>
</ul>
<h4>Výzkum &amp; HT <a href="https://lcms.cz/library?search=Vanquish+Horizon&amp;mainauthorItems=3">Vanquish Horizon</a></h4>
<ul>
<li>Vysokotlaké binární gradienty</li>
<li>Špičková přesnost a správnost</li>
<li>Dva režimy termostatování</li>
<li>Bezkonkurenční citlivost detekce</li>
<li>Biokompatibilní</li>
<li>Integrace více detekčních možností</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_HPLC_system_Vanquish_66e5304aa7/Pragolab-HPLC-system-Vanquish.jpg" alt="Pragolab: Konstrukce HPLC systému Thermo Scientific Vanquish"/>
<ul>
<li>Integrovaná modularita</li>
<li>Spojení na bázi viperů , bez nutnosti nástrojů</li>
<li>Plynulý nástřik SmartInject</li>
<li>Vylepšené detektory</li>
<li>Unikátní technologie termostatování kolon</li>
<li>Zlepšená LC/MS podpora a integrace</li>
<li>Snížená hmotnost systému</li>
<li>Odstranitelné dveře pro snadnější přístup</li>
</ul>
<h4>Podívejte se také na <a href="https://lcms.cz/webinars?search=Vanquish">přehled Webinářů</a> k HPLC/UPLC systémům Vanquish.</h4>
<ol>
<li>Highly Sensitive and Robust LC-MS/MS Solutions for Quantitation of Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Products
</li>
<li>Panel Discussion: Lessons Learned from Transitioning to New Chromatography Instrumentation and Vendors 
</li>
<li>Solving the Challenges and Workflow Dilemma of High-throughput Multi-residue Pesticide Screening Program in a Quality Control Environment
</li>
<li>Advancement of Analytical Technology for Oligonucleotide Analysis Using High-Resolution Accurate-Mass Mass Spectrometry
</li>
<li>Charged Aerosol Detection Symposium - Session 1
</li>
<li>Panel Discussion: Making Instrument Equivalency Assessments and Actions Successful
</li>
</ol>

Demonstrace moderních separačních technik (HPLC.cz 2021)

Antifungální látky neboli antimykotika, obvykle označují skupinu léčiv, které se používají k léčbě a prevenci mykóz. Do této skupiny patří léky, jako je například vorikonazol, posakonazol či flukonazol, a používají se k léčbě život ohrožujících fungálních infekcí. Nicméně tyto léky mají velice úzký terapeutický rozsah, a to může vést k velmi odlišným individuálním účinkům.
Kvantifikace antimykotik se tradičně prováděla pomocí HPLC s UV detektorem, avšak tyto metody zabírají příliš mnoho času. My se podíváme na metody založené na LC-MS, které mají lepší selektivitu a zabírají daleko méně času – s přístroji Thermo Scientific se to dokonce zvládne i za 3,6 minut!
Nejprve se musí vzorky chromatograficky oddělit na <a href="https://lcms.cz/products/396">UHPLC Vanquish Flex</a> a poté dochází k detekci na hmotnostním spektrometru <a href="https://lcms.cz/products/414">TSQ Quantis</a> s HESI v pozitivním ionizačním módu.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Popis_parametru_SRM_d121dab274/Pragolab-Popis-parametru-SRM.png" alt="Pragolab: Tabulka a popis SRM parametrů"/>
Výsledky se pak vyhodnotí na platformě <a href="https://lcms.cz/products/140">ClinMass TDM Platform</a> s ClinMass Add-On setem pro antimykotika od <a href="https://lcms.cz/products?manufacturerItems=56">RECIPE Chemicals + Instruments</a>. 
Pokud se chcete dozvědět více o této metodě, přečtěte si <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/tn_66059_lc_ms_quantitation_8_antimycotics_human_plasma_tn66059_en_86cebb61a4/tn-66059-lc-ms-quantitation-8-antimycotics-human-plasma-tn66059-en.pdf">kompletní aplikační nótu</a>.
<blockquote>
<h5>Klíčová slova:</h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=antimycotics&amp;mainauthorItems=3">Antimykotika</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/tsq-quantis">Quantis</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc/vanquish-uhplc">Vanquish</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=clinmass&amp;mainauthorItems=3">ClinMass</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=tdm&amp;mainauthorItems=3&amp;manufacturerItems=53">TDM</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;instrumentationItems=31">LCMS</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=plasma">Plazma</a></li>
</ul>
</blockquote>
<h4>Aplikace analýzy <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=antimycotics">antimykotik v knihovně LabRulezLCMS</a></h4>
<ul>
<li>Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of eight antimycotics in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021 )
</li>
<li>Quantification of antimycotics in human plasma or serum by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2018)
</li>
<li>Quantification of nine antimycotic drugs in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of eleven antimycotics in human serum by TurboFlow chromatography coupled to high-resolution accurate-mass Orbitrap mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2019)
</li>
</ul>

Kvantifikace osmi antimykotik v lidské plazmě pomocí kapalinové chromatografie - tandemové hmotnostní spektrometrie pro klinický výzkum

Plazmatické metanefriny (PFM) jsou vysoce specifickými indikátory extraadrenálních chromafinních nádorů. Jelikož jsou katecholaminy metabolizovány v chromafinních buňkách na metanefriny nebo normetanefriny, můžeme tyto metabolity použít k diagnóze feochromocytomů. Stanovení PFM je velkou výzvou, jelikož se jedná o polární látky s nízkou molekulární hmotností a nízkou fyziologickou koncentrací v lidské plazmě. Nicméně s přístroji Thermo Scientific není žádná analýza nemožná!
Ke stanovení metanefrinů musí vzorky nejprve projít solid phase extrakcí (SPE), která je následována chromatografickou separací na UHPLC systému <a href="https://lcms.cz/products/396">Thermo Vanquish Flex</a>. K detekci dochází na přístroji <a href="https://lcms.cz/products/404">Thermo TSQ Altis</a> s HESI v pozitivním ionizačním módu s pomocí SRM. Tento hmotnostní spektrometr je založen na bázi trojitých kvadrupólů.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Tabulka_a_popis_SRM_parametru_8a98b6a136/Pragolab-Tabulka-a-popis-SRM-parametru.png" alt="Pragolab: Tabulka a popis SRM parametrů kvantifikace volných metanefrinů v lidské plazmě pomocí LC-MS/MS "/>
Výsledky se potom vyhodnotí v aplikaci <a href="https://lcms.cz/products/140">ClinMass</a>, která obsahuje kompletní kit pro stanovení volných metanefrinů v plazmě od společnosti <a href="https://lcms.cz/products?manufacturerItems=56">Recipe Chemicals + Instriments</a>.
Pokud se chcete o této metodě dozvědět více, přečtěte si <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/tn_73768_lc_ms_metanephrines_human_plasma_tn73768_en_f3dc545527/tn-73768-lc-ms-metanephrines-human-plasma-tn73768-en.pdf">kompletní aplikační nótu</a>. 
<h5>Klíčová slova:</h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=metanephrines">Metanefriny</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc-ms/kvadrupoly/tsq-altis-plus">Altis</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc/vanquish-uhplc">Vanquish</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=ClinMass">ClinMass</a></li>
<li><a href="**https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=TDM**">TDM</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc-ms">LCMS</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=human+plasma">Plazma</a></li>
</ul>
<h3>Aplikace analýzy <a href="https://lcms.cz/library?search=metanephrines&amp;mainauthorItems=3">metanefrinů v knihovně LabRulezLCMS</a></h3>
<ul>
<li>Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use (Aplikace | 2017)
</li>
<li>Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-MS/MS for clinical research (Aplikace | 2020)
</li>
<li>MSACL EU 2017: Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use (Postery | 2017)
</li>
<li>Determination and quantitation of catecholamines and metanephrines in urine with an efficient sample preparation and LC-MS/MS workflow for clinical research use (Aplikace | 2017)
</li>
<li>Plasma Free Metanephrines Quantitation with Automated Online Sample Preparation and Liquid Chromatography—Tandem Mass Spectrometry (Aplikace | 2012)
</li>
<li>Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-Pairing Solid Phase Extraction and LC-MS/MS with Porous Graphitic Carbon Column (Aplikace | 2011)
</li>
</ul>

LC-MS/MS kvantifikace volných metanefrinů v lidské plazmě pro klinický výzkum

<h5>Špičkové přístroje:</h5>
<ul>
<li>od <a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/vanquish-core-hplc">rutinního modelu Core</a> s tlakovou odolností do 700 barů</li>
<li>přes model Flex do 1000 barů</li>
<li>až po unikátní model Horizon do 1500 barů</li>
<li>byly rozšířeny o <a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc/vanquish-neo-nanohplc">nanoHPLC model Neo</a>.</li>
</ul>
Všechny modely vynikají zejména svou jednoduchou obsluhou a excelentními separačními možnostmi spolu s vynikající citlivostí.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Thermo_Vanquish_UHPLC_1_2d4c03011d/Thermo-Vanquish-UHPLC-1.webp" alt="Pragolab: Thermo Vanquish UHPLC"/>
Špičkové inovace jako SmartInject, různé módy vyhřívání kolon, vipery, integrace unikátních detektorů (Corona, DAD s LightPipe celou) včetně hmotnostních detektorů prostupují všemi modely řady Vanquish.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Rodina_HPLC_Vanquish_88fe11b281/Pragolab-Rodina-HPLC-Vanquish.webp" alt="Pragolab: Rodina HPLC Vanquish"/>
Vhodnou konfigurací lze modely Flex a Horizon rozšířit na systém Vanquish Duo, který umožňuje využití analytických schopností HPLC řady Vanquish nebývalým způsobem – duální analýza, tandemová analýza, inverzní gradient, analýzy na dvou LC-MS - to vše je skutečnost, a hlavně – vše na jednom, Vašem, přístroji!
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Srovnani_modelu_Core_Flex_a_Horizon_rady_HPLC_Vanquish_0a4ebfbe69/Pragolab-Srovnani-modelu-Core-Flex-a-Horizon-rady-HPLC-Vanquish.webp" alt="Pragolab: Srovnání modelů Core, Flex a Horizon řady HPLC Vanquish"/>
<blockquote>
<ul>
<li>LabRulez: <a href="https://lcms.cz/products/396">Thermo Vanquish UHPLC</a></li>
<li>LabRulez: <a href="**https://lcms.cz/products/397**">Thermo Vanquish Core HPLC</a></li>
<li>LabRulez: <a href="https://lcms.cz/products/398">Thermo Vanquish Neo nanoHPLC</a></li>
</ul>
</blockquote>
Ovládání celé řady HPLC Vanquish včetně případné koncovky hmotnostních detekcí je zajištěno softwarem <a href="https://lcms.cz/products/76">Chromeleon</a>. Ten zjednodušuje pracovní postup, umožňuje vynikající pohled na Vaše data, samozřejmostí je snadné použití, komplexní ovládání přístroje, automatizovaná analýza dat a flexibilní reportování.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Vanquish_Duo_Workflows_54a51d678e/Pragolab-Vanquish-Duo-Workflows.webp" alt="Pragolab: Vanquish Duo Workflows"/>
Není nic jednoduššího, než se připojit k uživatelům řady HPLC Vanquish!
<blockquote>
Pro více informací nás neváhejte kontaktovat na eliasova@pragolab.cz.
</blockquote>
<h3>Přehled nejnovějších dokumentů Thermo Vanquish HPLC/UHPLC v <a href="https://lcms.cz/library?from=2021&amp;instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=3&amp;publicationTypeItems=1-3-7-5-4&amp;search=Vanquish&amp;to=2022">knihovně LabRulezLCMS</a></h3>
<ul>
<li>Simultaneous reversed-phase and anion-exchange method scouting with a dual system for mRNA impurity determination (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Automated UHPLC method development for mebendazole and related impurities, from method scouting to robustness testing (Aplikace | 2022)
</li>
<li>HPLC determination of biogenic amines in beer (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Overcoming the challenges of liquid chromatography method transfer: A CDMO perspective (Technické články | 2022)
</li>
<li>End-to-end analytical workflow solution—Vanquish UHPLC Loader (Ostatní | 2021)
</li>
<li>Accelerating method development with Thermo Scientific Vanquish HPLC and UHPLC Method Development Systems (Ostatní | 2021)
</li>
<li>LC-MS: All-in-one nano-, capillary- and micro-flow Vanquish Neo UHPLC system binary pump (Ostatní | 2021)
</li>
<li>LC-MS: Robust long-term Vanquish Neo UHPLC system operation enabling high-performance high-pressure nanoLC separations (Technické články | 2021)
</li>
<li>LC-MS: Intelligent system operation with the Vanquish Neo UHPLC system User Interface (Ostatní | 2021)
</li>
<li>Charged aerosol detection - factors affecting uniform analyte response (Technické články | 2021)
</li>
<li>Evaluation of intra- and inter-system precision for HPLC analysis of active pharmaceutical ingredients and impurities (Technické články | 2021)
</li>
<li>Contraceptive dissolution testing by liquid chromatography using large volume injections (Aplikace | 2021)
</li>
<li>LC-MS: Redefining low-flow sample injection with the Vanquish Neo UHPLC system autosampler (Ostatní | 2021)
</li>
<li>Impurity analysis of gabapentin by HPLC-UV-CAD (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Comprehensive analysis of components and degradation products in coolants (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Getting the most out of your charged aerosol detector - TECHNICAL GUIDE (Příručky | 2021)
</li>
</ul>

Rodina HPLC Vanquish

Po odhalení nepřípustných hladin nitrosaminových nečistot v lécích za poslední roky, musely regulační orgány po celém světě vydat striktní standardy pro analýzu léčiv, a to obzvláště u těch, které vznikají chemickou syntézou. Díky těmto standardům je možné kontrolovat obsah těchto genotoxických sloučenin v lécích. Abychom zaručili zdraví a bezpečí pacientů společně s kvalitou léčiv, je potřeba dodržovat interní standardy, kdy denní dávka přijatých nitrosaminů nesmí přesáhnout 30 ppb. Tyto přísné limity platí jak pro aktivní ingredience, tak i pro kompletní a dokončená léčiva.
Aby došlo k usnadnění analýzy těchto sloučenin, FDA publikovala několik validovaných LCMS metod pro stanovení a kvantifikaci nitrosaminů v různých lécích. I když primární screening byl proveden pomocí <a href="https://lcms.cz/products?distributorItems=42&amp;instrumentationItems=30&amp;manufacturerItems=3">LC-ESI-HRMS metod</a>, FDA vzhledem k robustnosti a široké dostupnosti hmotnostních spektrometrů na bázi <a href="https://lcms.cz/products?distributorItems=42&amp;instrumentationItems=35&amp;manufacturerItems=3">trojitých kvadrupólů</a> později pro kvantifikaci nitrosaminů v léčivech publikovala i alternativní LC-MS/MS metodu.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_UHPLC_Thermo_Scientific_Vanquish_Horizon_a_Thermo_Scientific_TSQ_Quantis_34bf3686bb/Pragolab-UHPLC-Thermo-Scientifictm-Vanquishtm-Horizon-a-Thermo-Scientific-TSQ-Quantis.webp" alt="Pragolab: UHPLC Thermo Scientific™ Vanquish™ Horizon a Thermo Scientific TSQ Quantis"/>
Nicméně tato metoda byla validována pouze pro stanovaní N-nitrosodimethylaminu (NDMA) v rantidinu. Je tedy zřejmé, že bylo potřeba vyvinout další LC-MS/MS metody, které jsou schopné kvantifikovat několik nitrosaminových sloučenin najednou, jako je tomu například v již publikované aplikační nótě 65911 <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/an_65911_lc_ms_nitrosamine_angiotensin_receptor_blocker_an65911_en_c0018cabbf/an-65911-lc-ms-nitrosamine-angiotensin-receptor-blocker-an65911-en.pdf">„Stanovení šesti nitrosaminových nečistot v lécích blokujících angiotensin II receptory pomocí LC-MS/MS“</a>.
V celém článku si můžete dále přečíst o vysoce citlivých a robustních LC-SRM-MS metodách, které používají <a href="https://lcms.cz/products?distributorItems=42&amp;instrumentationItems=27&amp;manufacturerItems=3&amp;search=vanquish">UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Horizon</a> v tandemu s <a href="https://lcms.cz/products/411">hmotnostním spektrometrem na bázi trojitého kvadrupólu TSQ Quantis</a>. Tyto dva přístroje jsou dostatečně citlivé pro kvantifikaci 10 nitrosaminů v metforminových lécích. Tato metoda funguje v HESI i APCI módu a kvantifikační limit pro všechny nitrosaminy je pod 10 ppb při použití HESI a pod 5 ppb při použití APCI. 
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Limity_detekce_a_kvantifikace_nitrosaminu_v_tabletach_s_prodlouzenym_uvolnovanim_metforminu_HESI_c2baa96a57/Pragolab-Limity-detekce-a-kvantifikace-nitrosaminu-v-tabletach-s-prodlouzenym-uvolnovanim-metforminu-HESI.webp" alt="Pragolab: Limity detekce a kvantifikace nitrosaminu v tabletách s prodlouženým uvolňováním metforminu, HESI"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Limity_detekce_a_kvantifikace_nitrosaminu_v_tabletach_s_prodlouzenym_uvolnovanim_metforminu_APCI_3972bf214b/Pragolab-Limity-detekce-a-kvantifikace-nitrosaminu-v-tabletach-s-prodlouzenym-uvolnovanim-metforminu-APCI.webp" alt="Pragolab: Limity detekce a kvantifikace nitrosaminu v tabletách s prodlouženým uvolňováním metforminu, APCI"/>
👉 Více se dozvíte <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/an_74059_lc_ms_nitrosamine_impurities_metformin_an74059_en_2d04d5cbbd/an-74059-lc-ms-nitrosamine-impurities-metformin-an74059-en.pdf">zde</a>.
<blockquote>
Pro více informací nás neváhejte kontaktovat na eliasova@pragolab.cz.
</blockquote>
<h3>Přehled LC/MS aplikací Thermo Scientific pro analýzu Nitrosaminů ve farmaceutickém průmyslu <a href="https://lcms.cz/library?categoryItems=5&amp;instrumentationItems=31&amp;mainauthorItems=3&amp;search=nitrosamine">v knihovně LabRulezLCMS</a></h3>
<ul>
<li>Simultaneous quantitation of nine nitrosamines using a highly sensitive and LC-HRAM mass spectrometry method in multiple drug products (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Featured nitrosamine solutions (Ostatní | 2021)
</li>
<li>Determination of six nitrosamine impurities in angiotensin II receptor blocker drugs by LC-MS/MS (Aplikace | 2020)
</li>
<li>LC-MS/MS method for the quantification of 10 nitrosamine impurities in metformin (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Improved quantitation of eight nitrosamine impurities in metformin drug products using a TSQ Fortis Plus mass spectrometer (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Nitrosamine impurities analysis solution guide (Příručky | 2021)
</li>
<li>Nitrosamine impurities analysis using Thermo Scientific™ Orbitrap Exploris™ 120 MS (Prezentace)
</li>
<li>HRAM LC-MS method for the determination of nitrosamine impurities in drugs (Aplikace | 2020)
</li>
</ul>
-´Highly sensitive and robust LC-MS/MS solution for quantitation of nitrosamine impurities in metformin drug products (Aplikace | 2021)
<ul>
<li>Reliable quantitation of 11 nitrosamine impurities in metformin drug products using Orbitrap Exploris 120 mass spectrometry (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Detection and analysis of N-nitrosodimethylamine in ranitidine by using Q Exactive Focus High Resolution Mass Spectrometry (Aplikace | 2020)
</li>
<li>Analysis of Nine N-Nitrosamines Using Liquid Chromatography - High-Resolution, Accurate-Mass Mass Spectrometry (Aplikace | 2016)
</li>
<li>High-resolution accurate-mass liquid chromatography mass spectrometry (HRAM LC-MS) methodology for the determination and quantitation of nitrosamine impurities in drug products (Aplikace | 2020)
</li>
<li>Tomorrow&#39;s quantitation (Ostatní | 2019)
</li>
<li>Orbitrap quantitation: lab of the future - Close your uncertainty gap with the selectivity and confidence of HRAM (Příručky | 2016)
</li>
</ul>

Vysoce citlivé a robustní LC-MS/MS řešení pro kvantifikaci nitrosaminových nečistot v metforminu

Problém je zdánlivě banální – nečistota je v průběžných testech skryta pod hlavním píkem či plíživě naroste ve stresových či stabilitních studiích, kdy je produkt podroben testovaní v čase – a následný úder je mnohem bolestnější, neboť drtivá většina těchto nečistot je odhalena na <a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc">HPLC</a> s UV detekcí (v 95 % případů s mobilní fázi nekompatibilní s MS, tj. s netěkavými anorganickými pufry či iontově párovými činidly) bez jakéhokoliv náznaku strukturní informace.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_obr_1_ilustracni_chromatogram_vyskytu_necistoty_ve_finalnim_produktu_5a007609ad/Pragolab-obr.-1-ilustracni-chromatogram-vyskytu-necistoty-ve-finalnim-produktu.jpg" alt="Pragolab: Obr. 1: ilustrační chromatogram výskytu nečistoty ve finálním produktu"/>
Byla již neznámá nečistota přítomna ve vstupní surovině? Objevila se jakožto degradační produkt hlavní látky? Zanesla se z výrobního procesu či migrovala z obalového materiálu (viz problematika <a href="https://lcms.cz/library?search=Pragolab%20EXTRAHOVATELN%C3%89%20A%20LOUHOVATELN%C3%89%20L%C3%81TKY">Extractables/Leachables</a>)? Špičkové charakterizační aparatury jako jsou vysoko rozlišující hmotnostní spektrometr (<a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc-ms/orbitrapy">MS</a>) či spektrometr nukleární magnetické rezonance (<a href="https://www.pragolab.cz/molekularni-spektroskopie/nmr-picospin-80-mhz">NMR</a>) sice stoji opodál (v lepším případě), ale chybí propojení – jak dostat kýženou nečistotu do MS či NMR spektrometru? Nabízí se:
<ol>
<li>převést a optimalizovat metodu (mobilní fázi, kolonu a další podmínky) z HPLC-UV na HPLC-MS aparaturu a postupovat v identifikaci; tato varianta je časově náročná a není zřejmé a průkazné přiřazení píku nečistoty v původní a nové metodě
</li>
<li>frakcionovat nečistotu v semi-preparativním nebo v opakovaném analytickém módu pomocí sběrače frakcí a následně izolovat z rozpouštědla pro MS (potažmo NMR) nevhodného (původní mobilní fáze), což je proces taktéž značně náročný (technický popis ke stažení v <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/tn_72940_lc_fraction_collection_vanquish_tn72940_en_bee1390c47/tn-72940-lc-fraction-collection-vanquish-tn72940-en.pdf">aplikačním listu</a> a <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/ps_72774_fraction_collector_ps72774_en_222f2598dc/ps-72774-fraction-collector-ps72774-en.pdf">dokumentaci</a> ke kolektoru)
</li>
<li>provést on-line &quot;výřez&quot; eluující nečistoty (tzv. heart-cutting), zachytit ji na trap kolonce a nadávkovat do MS (s předraženou separací nebo bez) v druhém kanálu/dimenzi.
</li>
</ol>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_obr_2_frakcionacni_postup_pri_identifikaci_necistot_d6b3f0275c/Pragolab-obr.-2-frakcionacni-postup-pri-identifikaci-necistot.jpg" alt="Pragolab: Obr. 2: frakcionační postup pří identifikaci nečistot.jpg"/>
S vývojem <a href="https://lcms.cz/library?search=vanquish%20duo%202d&amp;mainauthorItems=3">duálních systémů Vanquish</a> a plně &quot;GMP compliance&quot; softwaru Chromeleon, který je schopen integrovat separační, izolační a vysoko rozlišující hmotnostně spektrometrickou část (<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;instrumentationItems=33&amp;search=orbitrap">Orbitrap</a>) se tato varianta jeví jako ideální. Navíc masivní nástup biofarmak na bázi monoklonálních protilátek (mAB), jejichž charakterizační procedura označovaná jako <a href="https://lcms.cz/library?search=multi-attribute%20MAM&amp;mainauthorItems=3">Multi Attribute Method (MAM)</a> se bez MS neobejde, katapultovala Orbitrap na pomyslnou příčku strukturně analytického nástroje číslo jedna. 
Nutno taktéž s respektem dodat, že chromatograficky separovat některé blízké či variantní <a href="https://lcms.cz/library?search=TRENDY%20V%20CHARAKTERIZACI%20BIOFARMACEUTIK">analogy biofarmaceutických látek</a> bez složitých – MS nekompatibilních – mobilních fází (zatím) nelze. I z těchto důvodu je rapidní rozvoj heart-cuttingu s orbitální pastí pod jedním SW (taktéž vedle zavedení ortogonální techniky <a href="https://lcms.cz/library?search=zipchip&amp;mainauthorItems=3">ZipChip CE-MS</a>, kapilární elektroforézy na chipu implementovaném do iontového zdroje Orbitrapu) s povděkem vítán širokou obcí strukturních analytiků na pokraji bezradnosti.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_obr_3_chromatogram_doprovodnych_variantnich_analogu_adalimumabu_0d30c3f92d/Pragolab-obr.-3-chromatogram-doprovodnych-variantnich-analogu-adalimumabu.jpg" alt="Pragolab: Obr. 3: chromatogram doprovodných variantních analogů adalimumabu.jpg"/>
Při bližším prozkoumání <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/tn_73298_hplc_1d_lc_or_heart_cut_2d_lc_tn73298_en_4044c4c0da/tn-73298-hplc-1d-lc-or-heart-cut-2d-lc-tn73298-en.pdf">schématu duálního systému Vanquish</a> (a po překonaní přirozeného prvotního odporu k rozklíčování pozic přítomných tři vícecestných ventilů), jež byl vyvinut pro tyto účely, vyplynou následující zcela unikátní a ocenitelné vlastnosti:
<ul>
<li>systém lze provozovat jako 2D-HPLC se zmiňovaným heart-cuttingem</li>
<li>systém lze provozovat bez jakéhokoliv HW přenastavení jako dvě nezávislé a fluidně i teplotně oddělené jednotky (HPLC-UV a HPLC-UV-MS) se společným zásobníkem vzorků (ale <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/ps_72650_lc_ms_vanquish_dual_split_sampler_ps72650_en_c0c37dea5f/ps-72650-lc-ms-vanquish-dual-split-sampler-ps72650-en.pdf">dvěma oddělenými injektory</a>)</li>
<li>obě výše uvedené varianty jsou ovládány jedním operatérem z jednoho PC, přičemž separační část sestavy zabere v laboratoři plochu jednoho HPLC.</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_obr_4_schema_dualniho_UHPLC_systemu_Vanquish_pro_2_D_HPLC_bez_nutnosti_manualniho_prestaveni_na_HPLC_UV_a_HPLC_UV_MS_2_16a5db77c6/Pragolab-obr.-4-schema-dualniho-UHPLC-systemu-Vanquish-pro-2D-HPLC-bez-nutnosti-manualniho-prestaveni-na-HPLC-UV-a-HPLC-UV-MS-2.jpg" alt="Pragolab: Obr. 4: schéma duálního UHPLC systému Vanquish pro 2D-HPLC bez nutnosti manuálního přestavění na HPLC-UV a HPLC-UV-MS"/>
<h3>Typická modelová situace řešená s úsměvem, bez stresu a za potlesku zúčastněných může vypadat následovně.</h3>
Strukturní analytik sjíždí sérii vzorků od svých kolegů - syntetiků a potvrzuje navržené struktury s metodou A na systému HPLC-UV-MS s Acclaim kolonou (přidává navíc elementární složení získané při rozlišeni 140 000 FWHM a navrhuje struktury přítomných intermediátů). 
Vedle toho s metodou B, jež má v mobilní fázi obsažen fosfátový pufr a triethylamin, zkoumá na C18 koloně přítomnost neznámé nečistoty, kterou objevili jeho kolegové z HPLC oddělení a ve stresových testech narostla k úctyhodnému zastoupení 0,3 %; vztaženo k hlavní látce při 280 nm. 
Připravuje si metodu C, do které vnáší retenční čas zkoumané nečistoty, jež bude vyříznuta z fosfátové/triethylaminové separace, fokusována a propláchnuta na on-line trap kolonce a vymyta do fáze acetonitril/voda na Acclaim kolonu a podrobena MS experimentu. 
Překvapivě poté zjišťuje, že nejde o jednu nečistotu, ale dvě izomerní formy a následně navrhuje jejich elementární složení a struktury (pomocí MS/MS, <a href="https://lcms.cz/library?search=mzCloud">mzCloud</a> a MassFrontier). 
Jde to s kolegy zapít. Nikoliv nerad, ale s rozpaky. Je toho v poslední době moc. 
Po implementaci nového duálního systému Vanquish s Orbitrapem zažívá úspěchy spojené s oslavami na denní bázi.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_obr_4_Chromeleon_f986b46adc/Pragolab-obr.-4-Chromeleon.jpg" alt="Pragolab: Thermo Scientific Chromeleon Chromatography Data System (CDS) and Thermo Scientific Vanquish UHPLC System for 2D-LC"/>

Nové nástroje k identifikaci nečistot v oblasti HPLC a LC/HRMS Orbitrap

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Vědecká konference "Česká chromatografická škola - HPLC.cz" patří mezi pravidelná setkání odborníků pracujících v oblasti analytické chemie se zaměřením na separační metody, zejména HPLC/UHPLC, SFC a kapilární elektroforézu, ale i další techniky.

Česká chromatografická škola - HPLC.cz

Jsme jedním z lídrů na českém a slovenském trhu v oblasti laboratorních zařízení a svým zákazníkům přinášíme špičkové přístroje z oboru analytické chemie a fyzikálních měření více než 25 let.

Pragolab

Waters Softwarové školení Empower Basic

Online kurz: software NOVA

Aktuální trendy a aplikace hmotnostní spektrometrie v analytické praxi

Navigating Metabolomics Study Design and Method Choices

Towards structural glycoproteomics

Development of a Targeted Multiple Reaction Monitoring (MRM) Method for Fentalogues and Nitazene Derivatives