Tip pro přípravu vzorků – Co je to matricový efekt?

Souhrnný vliv všech složek vzorku – kromě samotného analytu – na odezvu signálu se nazývá matricový efekt. Komponenty matrice, které koeluují s analyt(y), mohou způsobit zesílení nebo potlačení signálu analytu ve srovnání s hodnotou naměřenou u standardního roztoku analytu (tedy bez přítomnosti matrice). Pokud se matricový efekt nevyhodnotí a/nebo nekoriguje, může mít zásadní dopad na přesnost kvantifikace.

Pro stanovení matricového efektu lze provést jednoduchý experiment – porovnat odezvu extrahovaného analytu s odezvou neextrahovaného analytu.

Phenomenex: Vzorec pro výpočet matricového efektu

Nejčastějším přístupem, jak se vyhnout nežádoucím matricovým efektům, je odstranění matrice pomocí technik přípravy vzorku (viz Obrázek 1). Tyto techniky mohou být velmi jednoduché – například filtrace vzorku, precipitace proteinů, extrakce z kapaliny do kapaliny, nebo pokročilejší, jako je extrakce na pevné fázi (SPE) či imunoadsorpční zachycení. Matricový efekt lze v některých případech snížit nebo odstranit také optimalizací LC metody, například pomocí gradientů nebo volbou jiné kolony. Příprava vzorku je však často preferována, protože zároveň prodlouží životnost LC kolony.

Phenomenex: Obrázek 1 – Běžné techniky přípravy vzorku seřazené podle rostoucí selektivity.

Typickým příkladem matricového efektu je potlačení signálu pozorované při analýze klinických vzorků, jako je krevní plazma nebo sérum, na hmotnostně spektrometrických detektorech. Tyto vzorky obvykle procházejí precipitací proteinů jako nejjednodušším krokem čištění před analýzou. Ten sice pomůže omezit zanášení LC kolony proteiny, ale neodstraní další kontaminanty. Komponenty matrice – zejména fosfolipidy – mohou významně negativně ovlivnit LC analýzy a časem dokonce poškozovat části systému.

Na Obrázku 2 je porovnán interferující signál pocházející z fosfolipidů u:
(A) séra po pouhé precipitaci proteinů a
(B) séra dále vyčištěného extrakcí na pevné fázi pomocí sorbentu Strata™-X PRO.

Phenomenex: Obrázek 2 – Chromatografy stop fosfolipidů v lidském séru po precipitaci proteinů.

Po vyčištění pomocí Strata-X PRO byla pozorována desetinásobná redukce interferujícího signálu z fosfolipidů. Tento polymerní sorbent byl speciálně navržen pro pokročilé odstranění matrice a – jak je vidět výše – účinně odstraňuje fosfolipidy i škodlivé částice ze vzorku, čímž zlepšuje výtěžnost analytů i reprodukovatelnost.

Doufáme, že pro vás byl tento tip užitečný! Prohlédněte si náš nástroj a produkty níže.

Strata-X PRO SPE produkty

• Phenomenex: Strata-X PRO SPE

Phenomenex: Strata-X PRO SPE

• SPE Method Development Tool