Jak se liší SPE na normální fázi (NP) od SPE na reverzní fázi (RP)?

SPE na normální fázi (NP) využívá jako retenční mechanismus polární interakce. Patří mezi ně vodíkové vazby, dipól–dipól, indukovaný dipól, π–π interakce apod. Tyto interakce probíhají mezi polárními funkčními skupinami analytů a polární chemii sorbentu.

SPE na reverzní fázi (RP) využívá nepolární, hydrofobní interakce. Typicky se jedná o Van der Waalsovy síly, Londonovy disperzní síly, π–π interakce atd. Probíhají mezi uhlíkem bohatými, hydrofobními částmi analytů a sorbentu.

Kdy volit normální fázi (NP)?

Normální fáze se používá tehdy, když jsou matrice rozpustné pouze v organických rozpouštědlech. Typickými příklady jsou:

• olej
• tuk
• máslo

Ideální je vzorek před aplikací na sorbent naředit nepolárním rozpouštědlem, např. hexanem. Vzorek lze poté promýt hexanem nebo 5% dichlormethanem v hexanu (analogicky k promývání 5% MeOH ve vodě u RP SPE metod), aby se odstranily interferující složky matrice.

Eluce se provádí polárním rozpouštědlem, které dokáže narušit polární interakce mezi analyty a sorbentem.

Frakcionace

Frakcionaci lze provádět aplikací rozpouštědel v pořadí rostoucí polarity, případně směsí rozpouštědel s odlišnou polaritou.

Níže je uveden rychlý přehled rozpouštědel používaných v SPE na normální fázi, seřazených podle vzestupné polarity.

Rozpouštědla podle polarity (od nejméně polárních po nejpolárnější)

• Hexan
• Isooctan
• Tetrachlormethan
• Toluen
• Benzen
• t-butyl methyl ether
• Chloroform
• Dichlormethan
• Diethylether
• Ethylacetát
• Tetrahydrofuran (THF)
• Aceton
• Acetonitril
• 40 % MeOH v acetonitrilu
• 20 % MeOH v diethyletheru
• 20 % MeOH v dichlormethanu
• Isopropanol
• Methanol
• Voda
• Kyselina octová

Přetlakový manifold pro zjednodušenou přípravu vzorků

• Presston 1000

Phenomenex: Přetlakový manifold pro zjednodušenou přípravu vzorků