Jak se liší SPE na normální fázi (NP) od SPE na reverzní fázi (RP)? Jak se rozhodnout, kterou zvolit?

Normal phase SPE (extrakce na normální fázi) využívá polární interakce jako retenční mechanismus. Tyto interakce zahrnují vodíkové vazby, dipól-dipól interakce, indukovaný dipól, π-π interakce atd. Dochází k nim mezi polárními funkčními skupinami analytů a polárními sorbenty.

Reversed phase SPE (extrakce na reverzní fázi) využívá nepolární, hydrofobní interakce. Tyto interakce zahrnují Van der Waalsovy síly, disperzní síly (Londonovy síly), π-π interakce atd. Probíhají mezi uhlovodíkovými, hydrofobními částmi analytů i sorbentu.

Při práci s matricemi vzorků rozpustnými pouze v organických rozpouštědlech se obvykle volí metoda na normální fázi. Příklady takových matric jsou oleje, tuky nebo máslo.

V ideálním případě se vzorek před nanesením na sorbent naředí nepolárním rozpouštědlem (např. hexanem). Poté může být promyt hexanem nebo 5% dichlormethanem v hexanu (analogicky k promývání 5% MeOH ve vodě v metodách reverzní fáze za účelem odstranění interferencí matrice). Eluce se následně provádí polárním rozpouštědlem, které přeruší polární interakce mezi analytem a sorbentem.

Frakcionace může být provedena použitím rozpouštědel v pořadí rostoucí polarity, nebo směsí rozpouštědel s různou polaritou.

Níže je uveden stručný přehled rozpouštědel podle vzrůstající polarity, používaných při SPE na normální fázi:

Rozpouštědla podle polarity

Od nízké po vysokou polaritu:

• Hexan
• Isooktan
• Tetrachlormethan
• Toluen
• Benzen
• t-butyl methyl ether
• Chloroform
• Dichlormethan
• Diethylether
• Ethylacetát
• Tetrahydrofuran (THF)
• Aceton
• Acetonitril
• 40 % MeOH v acetonitrilu
• 20 % MeOH v diethyletheru
• 20 % MeOH v dichlormethanu
• Isopropanol
• Methanol
• Voda
• Kyselina octová