Výhody použití imobilizovaných stacionárních fází při chirálních separacích

Chirální stacionární fáze na bázi polysacharidů se široce používají při separaci enantiomerů. Jejich použití přináší řadu výhod, zejména široké chirální rozpoznávání, které vyplývá z četných chirálních center v sacharidových jednotkách tvořících stacionární fázi. Na tyto jednotky jsou navázány polární aromatické skupiny, jež zvyšují selektivitu. Navázání aromatických skupin tak poskytuje výraznější chirální selektivitu oproti jiným typům stacionárních fází.

Polysacharidové fáze nabízejí velkou flexibilitu z hlediska typu mobilní fáze, s níž lze pracovat, a umožňují práci v normální, polární organické, reverzní fázi i v SFC – a to vše s využitím jediné chirální kolony. Jsou zároveň odolné, robustní a nabízejí dobrou kapacitu, protože jsou na bázi oxidu křemičitého.

Polysacharidová chirální fáze může být na částicích oxidu křemičitého nanesena nebo imobilizována. Tento rozdíl může ovlivnit selektivitu buď přímo – změnou interakcí s fází, nebo nepřímo – rozšířením škály rozpouštědel, která lze použít při práci s imobilizovanou fází oproti fázi potažené.

Phenomenex: Výhody použití imobilizovaných stacionárních fází při chirálních separacíchPhenomenex: Výhody použití imobilizovaných stacionárních fází při chirálních separacích

Většina chirálních stacionárních fází na bázi polysacharidů je potažená, což znamená, že stacionární fáze není kovalentně navázána na podkladový oxid křemičitý. V posledních letech však bylo několik těchto fází imobilizováno na křemičité částice, což znamená, že jsou kovalentně vázané a vykazují vyšší stabilitu i v širším spektru agresivnějších rozpouštědel. Možnost použití rozšířeného spektra rozpouštědel rozšířila také možnosti selektivity těchto chirálních stacionárních fází. Níže uvádíme několik tipů, jak maximalizovat chirální selektivitu pomocí imobilizovaných polysacharidových fází.

S imobilizovanou fází máte při vývoji metod k dispozici širší spektrum organických rozpouštědel, což může umožnit vyřešit i notoricky problematické enantiomery pomocí silnějších organických rozpouštědel.

Na imobilizované fázi Cellulose-5 bylo dosaženo rozlišení ornidazolu na úrovni základní linie zavedením MtBE do mobilní fáze; tato kombinace vykázala lepší rozlišení ve srovnání s potaženou fází Cellulose-1.

Phenomenex: Výhody použití imobilizovaných stacionárních fází při chirálních separacích

Chirální separace ornidazolu na Lux 5 µm i-Celluslose-5

• Kolona: Lux 5µm i-Cellulose-5, LC kolona
• Rozměry: 250 x 4,6 mm ID
• Objednací číslo: 00G-4756-E0
• Typ eluce: izokratická
• Eluent A: 0,1 % ethylamin v MtBE
• Průtok: 1 ml/min
• Teplota kolony: pokojová
• Detekce: UV-Vis, proměnná vlnová délka (UV) @ 254 nm (pokojová)

Phenomenex: Výhody použití imobilizovaných stacionárních fází při chirálních separacích

Ornidazol na Lux 5 µm Cellulose-1 v NP

• Kolona: Lux 5µm Cellulose-1, LC kolona
• Rozměry: 250 × 4,6 mm ID
• Objednací číslo: 00G-4459-E0
• Typ eluce: izokratická
• Eluent A: hexan/ethanol (80:20) + 0,1 % DEA
• Průtok: 1 ml/min
• Teplota kolony: pokojová
• Detekce: UV-Vis, proměnná vlnová délka (UV) @ 220 nm (pokojová)

Nástřik silných organických rozpouštědel

Mnoho aplikací vyžaduje použití silného organického rozpouštědla pro nástřik – u potažené fáze to může vést k rozpuštění stacionární fáze a ke ztrátě selektivity. U imobilizované fáze k poškození nedochází a selektivita je zachována po celou dobu životnosti kolony. Při použití imobilizované fáze nebyla pozorována žádná změna v rozlišení, a to ani tehdy, když bylo nástřikovým rozpouštědlem DMSO.

Podmínky pro všechny kolony

• Kolona: Lux 5µm i-Cellulose-5
• Rozměry: 250 × 4,6 mm ID
• Objednací číslo: 00G-4756-E0
• Mobilní fáze: methanol/DEA (100:0,1)
• Průtok: 1,5 ml/min
• Detekce: UV @ 280 nm
• Teplota: 27 °C
• Vzorek: laudanosin
• Ředicí rozpouštědlo: dimethylsulfoxid (DMSO)

Souhrn

Chirální stacionární fáze na bázi polysacharidů poskytují široké chirální rozpoznávání a umožňují využití celé řady kombinací mobilních fází i selektivit. To usnadňuje dosažení dobrého enantiomerního rozlišení téměř u všech chirálních molekul, pokud je proveden metodický a důkladný screening.