<p><strong>Od roku 2018 se na našem pracovišti <a href="http://www.radanal.cz/cs/">Institutu Nutrice a Diagnostiky s.r.o.</a> v Pardubicích zabýváme průtokovou injekční analýzou ve spojení s multikanálovou elektrochemickou detekcí (FIA-ECD). K téhle originální metodě jsme dospěli po více než 20 letech zkušeností s elektrochemickou detekcí HPLC. FIA-ECD se ukazuje jako jediné možné řešení pro hodnocení antioxidačních látek ve stovkách vzorků extraktů z ovoce, listů, kůry stromů a bylin. Zajímavým zjištěním je i sledování celkové antioxidační aktivity moči ve vztahu k lidskému zdraví.</strong></p>
<p>V případě zájmu o stanovení konkrétních látek ve víně (ve vztahu ke zdraví např. resveratrol, rutin, quercetin) je na našem pracovišti volena metoda <strong>UPLC-MS/MS</strong> (Thermo Fisher Scientific – Ultimate 3000/TSQ Quantum Access Max) – <strong>vysokoúčinná kapalinová chromatografie s detekcí na trojitém kvadrupólu</strong>. </p>
<blockquote>
<p><strong>Oldschooler&#39;s s jsou rozhovory s Tomášem Nezmeškalem, kde veteráni z veřejného prostoru odhalují příběhy a historky, které od nich ještě nezazněly.</strong></p>
</blockquote>
<h3><strong>Stanovení celkové antioxidační aktivity v biologickém materiálu pomocí FIA-ECD metody</strong></h3>
<p>Naše laboratoř se dlouhodobě zabývá využití <strong>elektrochemie</strong> pro studium bioaktivních látek. Byla vyvinuta metoda <strong>průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí</strong> (FIA-ECD) pro hodnocení celkové <strong>antioxidační aktivity</strong> nápojů, potravních doplňků a extraktů z ovoce, listí a bylin. Tato metoda je založená na měření náboje v μC a poskytuje objektivní srovnání schopností antioxidačních látek předávat náboj nezávisle na matrici. Byla použita pro hodnocení celkové antioxidační aktivity <strong>lidské moče</strong>. Metoda poskytuje velmi zajímavé srovnání.</p>
<p><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_1_Vzorky_moci_analyzovane_FIA_ECD_354ec6250f/RADANAL-Obrazek-1-Vzorky-moci-analyzovane-FIA-ECD..png" alt="RADANAL: Obrázek 1: Vzorky moči analyzované FIA-ECD."/></p>
<h3><strong>FIA-ECD</strong></h3>
<h5><strong>Přístrojové vybavení pro FIA-ECD:</strong></h5>
<ul>
<li><strong>Model 582</strong> Solvent Delivery Module</li>
<li><strong>Model 542</strong> HPLC Autosampler</li>
<li>Elektrochemický detektor <strong>Coularray Detector</strong> ESA, Model 5600A (ESA Inc, USA)</li>
</ul>
<h5><strong>FIA-ECD podmínky:</strong></h5>
<ul>
<li><strong>Mobilní fáze:</strong> 90 % KH2PO40,05M + 10% ACN (pH 4,8)Průtok: 1 ml/min</li>
<li><strong>Isokratický</strong> proces</li>
<li><strong>Nástřik:</strong> 10 μl</li>
<li><strong>Potenciály:</strong> 200, 400, 600 a 800 mV</li>
<li><strong>Čas analýzy:</strong> 1,1 min</li>
<li>Vzorek zředěný mobilní fází 1 : 3 (<strong>plná moč : mobilní fáze</strong>)</li>
</ul>
<p><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_2_Pristrojove_vybaveni_pro_FIA_ECD_pumpy_autosampler_Coul_Arraydetektor_a_analyzator_86cc9d4774/RADANAL-Obrazek-2-Pristrojove-vybaveni-pro-FIA-ECD-pumpy-autosampler-CoulArraydetektor-a-analyzator.png" alt="RADANAL: Obrázek 2: Přístrojové vybavení pro FIA-ECD - pumpy, autosampler, CoulArraydetektor a analyzátor"/></p>
<h3><strong>HPLC-MS/MS</strong></h3>
<h5><strong>Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS:</strong></h5>
<ul>
<li><strong>UltiMate 3000</strong> Binary RSLC</li>
<li><strong>TSQ Quantum Access Max</strong> s ionizací elektrosprejem H–ESI (ThermoFisher Scientific, USA)</li>
</ul>
<h5><strong>HPLC podmínky:</strong></h5>
<p><strong>Kolona:</strong> Kinetex F5 100 Å 1,7 μm 50 x 2,1 mm (Phenomenex)</p>
<ul>
<li><strong>Univerzální předkolona:</strong> Zorbax Eclipse XDB-C18, 4,6 x 5 mm, 1,8μm (Agilent)</li>
<li><strong>Mobilní fáze A:</strong> 0,1 obj. % kyseliny mravenčí ve vodě</li>
<li><strong>Mobilní fáze B:</strong> 0,1 obj. % kyseliny mravenčí v methanolu</li>
</ul>
<h5><strong>MS Parametry:</strong></h5>
<ul>
<li><strong>Ionizační mód:</strong> ESI+</li>
<li><strong>Scenovací mód:</strong> SRM</li>
<li><strong>Čas skenovacího cyklu:</strong> 0,5 s</li>
<li><strong>Tlak kolizního plynu:</strong> 1,5 mTorr</li>
<li><strong>Teplota kapiláry:</strong> 325 °C</li>
<li><strong>Teplota odpařovací jednotky:</strong> 300 °C</li>
<li><strong>Tlak sušícího plynu:</strong> 45 arb units</li>
<li><strong>Tlak čistícího plynu:</strong> 2 arb units</li>
<li><strong>Hodnota sprejovacího napětí:</strong> 3300 V</li>
</ul>
<h3><strong>Výsledky</strong></h3>
<p>Pomocí vyvinuté FIA-ECD metody byla zjištěna celková antioxidační aktivita ve vzorcích <strong>sbírané moči šedesátiletého dobrovolníka</strong> v období prosinec 2017 až listopad 2018 (celkem 281 vzorků). Ve vzorcích byly pomocí <strong>HPLC-MS/MS</strong> kvantifikovány <strong>markery oxidačního poškození</strong> DNA (8-hydroxy-2&#39;-deoxyguanosin) a RNA (8-hydroxyguanosin).V rámci studie byla posuzována <strong>souvislost mezi hladinami</strong> markerů poškození nukleových kyselin v moči a hladinami antioxidační aktivity lidské moče.</p>
<p><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_3_Stanoveni_celkove_antioxidacni_aktivity_ve_vybranych_vzorcich_pomoci_prutokove_injekcni_analyzy_s_elektrochemickou_detekci_869e102a97/RADANAL-Obrazek-3-Stanoveni-celkove-antioxidacni-aktivity-ve-vybranych-vzorcich-pomoci-prutokove-injekcni-analyzy-s-elektrochemickou-detekci..png" alt="RADANAL: Obrázek 3: Stanovení celkové antioxidační aktivity ve vybraných vzorcích pomocí průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí."/></p>
<p>Průměrná hodnota antioxidační aktivity vzorků moči (FIA-ECD) byla nalezena 360 ± 128 µC/ml a pohybovala se od 88 µC/ml do 872 µC/ml. Koncentrační hladiny biomarkerů sledovaných metodou HPLC-MS/MS se pohybovaly v rozmezí hodnot 1,5 - 163 ng/ml (8-hydroxyguanosin) a 0,1 - 103 ng/ml (8-hydroxy-2´-deoxyguanosin). Průběh nalezených koncentračních hladin analytů nekoreloval s antioxidační aktivitou moče. <strong>Bylo zjištěno, že z hlediska antioxidační aktivity může být lidská moč hodnotnější než kvalitní červené víno.</strong></p>
<p><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_4_Graficke_srovnani_vysledku_mereni_celkove_antioxidacni_aktivity_plne_moce_metodou_FIA_ECD_a_mereni_koncentrace_dvou_biomarkeru_metodou_UPLC_MSMS_16f6d32f0b/RADANAL-Obrazek-4-Graficke-srovnani-vysledku-mereni-celkove-antioxidacni-aktivity-plne-moce-metodou-FIA-ECD-a-mereni-koncentrace-dvou-biomarkeru-metodou-UPLC-MSMS.png" alt="RADANAL: Obrázek 4: Grafické srovnání výsledků měření celkové antioxidační aktivity plné moče metodou FIA-ECD a měření koncentrace dvou biomarkerů metodou UPLC-MS/MS"/></p>


Doporučuji se propít ke zdraví - Stanovení antioxidantů pomocí FIA-ECD a UHPLC-MS

Vliv stravy na antioxidační aktivitu lidské moče

Potraviny

Zdraví

Vědecký článek

Video

Poster

Je společnost zabývající se výzkumem a vývojem, prodejem a aplikační podporou chromatografických metod včetně chromatografického spotřebního materiálu. Společnost je organizátorem mezinárodní konference INDC a konference VITATOX.

RADANAL

RADANAL s.r.o.

Research And Development Analytical Nutrition Antiaging Laboratory působí v oboru aplikací kapalinové chromatografie pro studium a sledování vlivu přírodních látek, zejména vitaminů a dalších antioxidantů, na lidské zdraví, chování, stárnutí, duševní a fyzickou výkonnost a krásu.

Stanovení antioxidantů (RADANAL)

Analýza ve vzorcích ovoce (např. jablka, rybízy, angrešty, třešně, víno) metodou UHPLC-MS.

Analýza ve vzorcích ovoce metodou ultraúčinné kapalinové chromatografie kombinované s hmotnostní spektrometrií UHPLC-MS.

<h3><strong>Analyzované vzorky:</strong></h3>
<ul>
<li><strong>Ovoce</strong> (např. jablka, rybízy, angrešty, třešně, víno)</li>
</ul>
<h3><strong>Analyzované látky:</strong></h3>
<ul>
<li>Salicylová kyselina</li>
<li>p-kumarová kyselina</li>
<li>Gallová kyselina</li>
<li>Kávová kyselina</li>
<li>Ferulová kyselina</li>
<li>Syringová kyselina</li>
<li>Resveratrol</li>
<li>Floretin </li>
<li>Kaempferol</li>
<li>(+)-katechin</li>
<li>(-)-epikatechin</li>
<li>Kvercetin</li>
<li>Chlorogenová kyselina</li>
<li>Amygdalin</li>
<li>Floridzin</li>
<li>Rutin</li>
</ul>
<h3><strong>Přístrojové vybavení:</strong></h3>
<h5><strong>Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS</strong></h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=ultimate&amp;mainauthorItems=3"><strong>UltiMate 3000 Binary RSLC</strong></a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=access%20max&amp;mainauthorItems=3&amp;instrumentationItems=35-31-32"><strong>TSQ Quantum Access Max</strong></a> s ionizací elektrosprejem H–ESI</li>
</ul>


Stanovení antioxidantů (RADANAL)

Analyzované vzorky:

Analyzované látky:

Přístrojové vybavení:

Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS

Novinky

Vliv stravy na antioxidační aktivitu lidské moče

Doporučuji se propít ke zdraví - Stanovení antioxidantů pomocí FIA-ECD a UHPLC-MS