Analýza je určena k potvrzení identity a stanovení množství a peptidové čistoty Dihexa v tabletách, kapslích, lyofilizovaných vzorcích a surových API ve formě prášku. Test metodou HPLC poskytuje informace o obsahu cílové látky ve vzorku a její čistotě vzhledem k chromatograficky detekovatelným nečistotám.
Dihexa
Dihexa je syntetická peptidová sloučenina se sekvencí Hexanoyl-Tyr-Ile-Ahx-NH2. Molekulová hmotnost činí přibližně 504 Da.
Důležitým faktorem při analýze Dihexa je jeho omezená rozpustnost ve vodě. Volba rozpouštědla proto může významně ovlivnit množství látky, které přejde do roztoku a může být následně stanoveno pomocí HPLC. Pro lyofilizované vzorky je standardním postupem použití vody, zatímco jako volitelné alternativy lze použít DMSO nebo methanol.
Co analýza stanovuje
- Identitu Dihexa
- Množství Dihexa ve vzorku
- Peptidovou čistotu
- Obsah Dihexa v jednotlivé tabletě nebo kapsli
- Obsah Dihexa v mg na lahvičku u lyofilizovaných vzorků
- Alternativně čistotu m/m u surových API prášků
Parametry analýzy
- Cílová látka: Dihexa
- CAS číslo: 1401708-83-5
- Molekulová hmotnost: 504 Da
- Sekvence: Hexanoyl-Tyr-Ile-Ahx-NH2
- Analytická metoda: HPLC
- Mez detekce: méně než 1/20 obvyklé dávky v lahvičce
- Výsledný formát pro perorální přípravky: mg/tabletu nebo kapsli a peptidová čistota
- Výsledný formát pro lyofilizovaný vzorek: mg/lahvičku a peptidová čistota
- Alternativní výsledný formát: čistota m/m a peptidová čistota
- Minimální množství perorálního vzorku: 3 tablety nebo kapsle
- Minimální množství lyofilizovaného vzorku: 1 celá neotevřená lahvička s lyofilizátem
- Minimální množství surového API ve formě prášku: 30 mg v uzavřené skleněné lahvičce, která chrání vzorek před absorpcí vlhkosti
- Výchozí rozpouštědlo pro lyofilizovaný vzorek: voda
- Volitelná rozpouštědla: DMSO nebo methanol
- Průměrná doba zpracování: 7 pracovních dnů
Důležité upozornění – rozpustnost Dihexa
Dihexa má omezenou rozpustnost ve vodě, což je nutné zohlednit zejména při analýze lyofilizovaných vzorků.
Voda – standardní postup
Voda je výchozím rozpouštědlem používaným při standardní analýze. Dihexa však není ve vodě dobře rozpustná. Nerozpuštěné částice jsou před HPLC analýzou odstraněny filtrací, protože analyzovat lze pouze látku převedenou do roztoku.
Pokud část Dihexa zůstane nerozpuštěná, může být při filtraci odstraněna a výsledná naměřená koncentrace může být nižší než celkový obsah látky ve vzorku.
DMSO
DMSO umožňuje účinnější rozpuštění Dihexa a omezuje ztráty způsobené odstraněním nerozpuštěných částic před analýzou. Pokud je zvoleno DMSO, připravený roztok je určen pouze pro analytické testování.
Methanol
Methanol poskytuje velmi dobrou rozpustnost Dihexa a je vhodný pro maximalizaci extrakce látky před HPLC analýzou. Takto připravený roztok je rovněž určen pouze pro analytické testování.
U tablet a kapslí je doporučen standardní analytický postup.
Alternativní výsledný formát vyjádřený jako čistota m/m je určen pouze pro surové API ve formě prášku.
Doplňkové analýzy
Rozpouštědlo – methanol
- Použití methanolu namísto standardního vodného postupu při přípravě vzorku. Methanol zajišťuje lepší rozpustnost Dihexa a může omezit ztráty způsobené odstraněním nerozpuštěných částic.
Analýza TFA
- Detekce a stanovení množství kyseliny trifluoroctové (TFA) ve vzorku.
Kompletní nezpracovaná data
- Poskytnutí dostupných nezpracovaných analytických dat z hlavního testu i objednaných doplňkových analýz, pokud jsou pro danou metodu k dispozici.
Rozpouštědlo – DMSO
- Použití DMSO pro rozpuštění Dihexa před analýzou. Tato varianta může zlepšit převedení cílové látky do roztoku a omezit její ztráty při filtraci.
Kompletní nezpracovaná data
- Poskytnutí dostupných nezpracovaných analytických dat z hlavního testu i ze všech objednaných doplňkových analýz, pokud jsou pro danou metodu k dispozici.
Analýza přítomnosti fentanylu
Alternativní výsledný formát – čistota m/m
- Alternativní vyjádření výsledku jako hmotnostní čistota m/m. Tato možnost je určena výhradně pro surové API ve formě prášku.
Test variability
- Analýza více kusů vzorku za účelem posouzení variability v rámci jedné šarže. Všechny dodané vzorky musí pocházet ze stejné šarže stejného produktu.
Měření pH
- Stanovení přítomnosti bakteriálních endotoxinů, zejména lipopolysacharidů (LPS). Test je určen pouze pro hotové produkty a není vhodný pro surové práškové vzorky.
- Standardní test poskytuje přesné výsledky do 10 EU/lahvičku. Vyšší hodnoty jsou odhadované a pro jejich přesné stanovení je nutná další analýza s upraveným ředěním. Doporučuje se proto zaslat dvě lahvičky.
- Pokud je předem očekávána hodnota vyšší než 10 EU/lahvičku, lze metodu od začátku přizpůsobit vyššímu rozsahu.
- Elementární analýza poskytující přesné stanovení obsahu dusíku a síry. Výsledky lze využít ke stanovení čistého obsahu peptidu neboli Net Peptide Content (NPC).
Dodatečný protokol
- Vystavení samostatného dodatečného protokolu s jiným jménem klienta.
- LC-MS screening zaměřený na přítomnost jiných peptidů nebo degradačních produktů. Detekce je omezena na peptidy zahrnuté v nabídce dostupných analýz.
- Základní výsledek poskytuje pouze identifikaci kontaminujícího peptidu. Pokud je kontaminace zjištěna, lze následně objednat také stanovení jejího množství.
- Testy TAMC a TYMC kontrolují přítomnost bakterií, kvasinek a plísní v produktu. Pro analýzu je nutné zaslat další neotevřené kusy vzorku. Průměrná doba zpracování testu je 14 dnů.
- Stanovení přítomnosti arsenu, kadmia, olova a rtuti ve vzorku. Analýzu dalších kovů lze řešit individuálně.
