Automated Purification of Compound Libraries Using the Agilent 1260 Infinity Automated LC/MSD Purification System

Význam tématu

Preparativní kapalinová chromatografie je klíčovou metodou v oblasti farmaceutického vývoje a objevování nových léčiv. Potřeba oddělit a purifikovat velké soubory sloučenin vyžaduje rychlé a spolehlivé postupy, které minimalizují ruční zásahy a maximalizují výtěžnost a čistotu cílových sloučenin.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem technického přehledu je demonstrovat plně automatizovaný analyticko-preparativní pracovní postup pro čištění knihoven sloučenin pomocí systému Agilent 1260 Infinity Automated LC/MSD Purification System řízeného softwarem Agilent Automated Purification. Studie ukazuje od analytického scouting běhu až po sběr frakcí a vyhodnocení výsledků.

Použitá metodika a instrumentace

Pracovní postup sestával z následujících kroků:

• Analytický scouting běh s generickým gradientem na analytické cestě
• Identifikace cílových sloučenin podle extrahovaných iontových chromatogramů (EIC) MSD a UV signálů
• Automatické vypočtení a aplikace zaostřeného preparativního gradientu pro každou vzorkovou injekci
• Sběr frakcí řízený kombinací UV a hmotnostního detektoru (logický AND)
• Reanalýza získaných frakcí pro stanovení čistoty a výtěžku

Hlavní instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity Preparative Pump cluster (G1361A + G1391A)
• Dual-Loop Autosampler (G2258A), Quaternary Pump (G1311B), Prep Open-Bed Fraction Collector (G7159B)
• Diode Array Detector s preparativní kovovou kyvettou (G1315C), Agilent 6150 Single Quadrupole LC/MSD (G6150B)
• Agilent Automated Purification software A.01.04 a OpenLAB CDS ChemStation Edition C.01.07 SR2

Hlavní výsledky a diskuse

Software automaticky rozpoznal cílové impulzy v osmi nečistých vzorcích a vypočítal individuální preparativní gradienty. Frakcionace pomocí logické AND UV+MSD signálů snížila počet zbytečně sbíraných frakcí a optimalizovala kapacitu kolektoru. Po reanalýze frakcí byla dosažena čistota ≥94 % a výtěžky ≥91 % u sedmi z osmi sloučenin, přičemž jedna ukázala mírně nižší výtěžek (81 %). Interaktivní uživatelské rozhraní usnadnilo vizualizaci chromatogramů, spekter a umístění frakcí.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metodika přináší:

• Výrazné zkrácení času potřebného pro optimalizaci analy­tických a preparativních podmínek
• Eliminaci chyb vyplývajících z manuálního zásahu
• Vysokou reprodukovatelnost a konzistentní čistotu frakcí
• Intuitivní rozhraní vhodné pro zkušené uživatele i začátečníky

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj algoritmů pro prediktivní návrh gradientů a adaptivní řízení sběru frakcí na základě sekvenční analýzy dat. Integrace umělé inteligence a strojového učení může dále zrychlit vývoj metod a zvýšit efektivitu high-throughput screeningových postupů. Možné je také využití zelenějších rozpouštědel a miniaturizace preparativních technik.

Závěr

Agilent Automated Purification software v kombinaci s Agilent 1260 Infinity Automated LC/MSD Purification System představuje komplexní řešení pro plně automatizovanou preparativní chromatografii. Výsledky ukazují vysokou čistotu a výtěžek frakcí s minimálními manuálními zásahy, což významně urychluje proces čištění knihoven sloučenin.

Reference

• Florian Rieck; Agilent Technologies, Inc. Technical Overview, 2017.