Mass-Based Purification of Natural Product Impurities Using an Agilent 1260 Infinity II Preparative LC/MSD System

Význam tématu

Monitoring organických nečistot je nezbytné pro zajištění kvality a bezpečnosti potravinářských doplňků a farmaceutických produktů. Nežádoucí vedlejší produkty mohou ovlivnit účinnost i toxicitu finálního výrobku a jsou předmětem přísných regulací, například směrnice ICH Q3A.

Cíle a přehled studie

Studie demonstruje kompletní workflow od analytického stanovení k preparativní purifikaci přírodního extraktu obsahujícího dvě dosud neznámé nečistoty. Cílem bylo identifikovat, oddělit a izolovat nečistoty pro další charakterizaci pomocí hmotnostní detekce a UV signalizace.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analytické stanovení byl použit systém Agilent 1260 Infinity II LC/MSD (binary pump, vialsampler, DAD, MSD XT). Preparativní purifikace proběhla na Agilent 1260 Infinity II Preparative LC/MSD s modulátorem MS Flow, fraction collectorem a odpovídajícími sloupci Prep-C18 (4,6×100 mm pro analýzu, 21,2×100 mm pro preparativu). Mobilní fáze obsahovala 0,1 % kyselinu mravenčí ve vodě a methanolu. Detekce probíhala UV při 297 nm a SIM režimu MSD pro ionty m/z 823,4 a 839,4.

Hlavní výsledky a diskuse

Analytické stanovení odhalilo dvě neznámé nečistoty s cílovými ionty m/z 823,4 a 839,4, které byly rozlišené i při přetížení kolony hlavní složkou. Lineární škálování na preparativní podmínky se zachováním stejných retenčních časů (<0,2 min) umožnilo reproducibilní separaci. Frakční sběr řízený kombinací UV a MSD (AND trigger) vedl k čistotě izolovaných nečistot >98 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Efektivní přenos analytických podmínek na preparativní úroveň při zachování rozlišení.
• Specifické a citlivé vychytávání cílových látek pomocí MSD SIM triggeru.
• Možnost rychlé a automatizované frakční kolekce pro další strukturální analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další integrace online detekčních technik, automatizace frakční kolekce s vysokou propustností a využití green chemistry přístupů v přípravě mobilní fáze. Vývoj mikrofluidních preparativních systémů a pokročilých akcelerátorů hmotnostní spektrometrie umožní práci s nižšími objemy a vyššími výtěžky.

Závěr

Prezentovaná metodika kombinuje analytické průzkumné měření s preparativní purifikací za použití jednotného systému Agilent Infinity II. Workflow zajišťuje vysokou specifitu, reprodukovatelnost a čistotu izolovaných nečistot, což je klíčové pro jejich následné charakterizační studie.

Reference

1. ICH Q3A(R2): Impurities in New Drug Substances, 2006.