Estimation of Fat Soluble Vitamins, Ergocalciferol, and Cholecalciferol in Edible Oil

Význam tématu

Analýza vitamínů D2 (ergokalciferol) a D3 (cholekalciferol) v jedlých olejích je klíčová pro zajištění správné nutriční hodnoty a prevence nedostatku vitamínu D ve společnosti. Fortifikace olejů těmito vitaminy umožňuje efektivní distribuci a minimalizaci rizika onemocnění spojených s jejich nedostatkem.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout rychlou, citlivou a selektivní metodu pro současnou kvantifikaci vitamínů D2 a D3 v komplexní matrici jedlého oleje. Použit byl LC/MS/MS systém Agilent 6470 s trojitým kvadrupólem a APCI ionizací spojený s kapalinovou chromatografií Agilent 1290 Infinity II.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II quaternary pumpa s integrovaným degaserem
• Agilent 1290 Infinity II multikolávý termostat a multisampler
• Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 kolona (3,0 × 50 mm, 2,7 µm)
• Agilent 6470 triple quadrupole LC/MS s APCI zdrojem v pozitivním módu

Použitá metodika

Vzorek oleje se saponifikoval pomocí koncentrované KOH v ethanolu při 70 °C za refluxu. Po ochlazení a neutralizaci HCl se vitaminy extrahovaly hexanem, extrakt se odpařil pod dusíkovou atmosférou a zbytek se rozpustil v methanolu.
Chromatografické podmínky: Poroshell 120 EC-C18, tok 0,5 ml/min, teplota 40 °C, injekční objem 20 µl. Mobilní fáze A: vodný roztok 5 mM acetátu amonného s 0,02 % kyseliny octové, fáze B: methanol se stejnou přísadou. Gradient: 50 % B do 2 min, 100 % B do 4 min, návrat na 50 % B v 9,5 min, celková délka analýzy 10 min.
MRM parametry: D2 (m/z 385→107, 385→91), D3 (397→367, 397→259) s optimalizovanými fragmentory a energiemi srážek.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozsahu 10–500 ng/g s korelačními koeficienty ≥ 0,994. Limity kvantifikace LOQ činily 50 ng/g pro oba vitaminy. Reprodukovatelnost při šesti opakovaných injekcích spikovaných vzorků 50 ng/g dosáhla %RSD 4,7 pro D2 a 3,9 pro D3. Výtěžnost extrakce se pohybovala mezi 81 a 90 % při spikování na úrovni 50 a 100 ng/g.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká selektivita a citlivost umožňuje spolehlivou kvantifikaci vitamínu D v tukových matricích
• APCI zdroj minimalizuje matricový efekt v porovnání s ESI
• Rychlý analytický běh 10 min vhodný pro rutinní kontrolu kvality
• Metodu lze snadno implementovat v komerčních testovacích laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorků a využití nosičů do 96 jamek pro vyšší propustnost
• Nasazení stabilních izotopových standardů pro zvýšení přesnosti kvantifikace
• Rozšíření metody na další vitaminy rozpustné v tucích
• Miniaturizace a přímá analýza olejových vzorků s omezenou přípravou

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda poskytuje spolehlivý nástroj pro simultánní stanovení vitamínů D2 a D3 v jedlých olejích s vynikající citlivostí, reprodukovatelností a výtěžností extrakce. Metodu lze využít pro nutriční značení a monitoring kvality.

Reference

1. Stevens, Dowell. Determination of Vitamins D2 and D3 in Infant Formula and Adult Nutritionals by Ultra Pressure Liquid Chromatography with Tandem Mass Spectrometry Detection. J. AOAC Int. 2012, 95(3).
2. Staffas, Nyman. Determination of Cholecalciferol Vitamin D3 in Selected Foods by Liquid Chromatography, NMKL1 Collaborative Study. J. AOAC Int. 2003, 86(2).
3. LC/MS/MS Determination of Vitamin D in Food, Agilent Technologies Application Note 5990-8627EN, 2011.