Simultaneous Determination of Vitamin D2 and D3 in Milk

Význam tématu

Vitamin D je klíčový pro udržení homeostázy vápníku a fosforu a předchází malnutrici. V potravinářství se vitamíny D2 a D3 často přidávají do mléka a olejů jako levné řešení nedostatku. Kvantitativní analýza pomocí LC/MS/MS nabízí vysokou selektivitu a citlivost, avšak složitost mléčné matrice vyžaduje optimalizovanou přípravu vzorku.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout robustní metodiku pro simultánní stanovení vitamínů D2 (ergokalciferol) a D3 (cholekalciferol) ve vzorcích mléka s limitem detekce 0,4 ng/g. Metoda je navržena pro rutinní testování ve výrobních i komerčních laboratořích.

Použitá metodika

Vzorek mléčného prášku prochází saponifikací ethanolem obsahujícím 50% KOH a pyrogallol jako antioxidant. Následuje extrakce isooktanem, derivatizace 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione (PTAD) a ředění acetonitrilem. Pro kvantifikaci se používají deuterované interní standardy D2-d3 a D3-d6.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC (High Speed Pump G7104A, Vial Sampler G7129B, MCT G7130A)
• Agilent 6470 LC/TQ s AJS ionizačním zdrojem (G6470A)
• InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 kolona (40 °C)
• Spectrofotometr pro stanovení koncentrace standardů při 265 nm

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah od 0,4 do 40 ppb (R2 > 0,999) s LOQ 0,4 ng/g. Reprodukovatelnost stanovované koncentrace při 10 ppb spike byla lepší než 2,5 % RSD. Recoveries pro vitamín D2 dosáhly průměrně 98 % a pro D3 85 % ve spiked vzorcích. Maticové rušivé vlivy byly efektivně potlačeny.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená LC/MS/MS analýza umožňuje spolehlivé stanovování obou forem vitamínu D v různých typech mléčných výrobků. Díky vysoké citlivosti, selektivitě a reprodukovatelnosti je metoda vhodná pro rutinní kontrolu fortifikace v potravinářských i kontrolních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalšími kroky mohou být automatizace přípravy vzorku, rozšíření metody na jiné potravinové matrice či použití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro identifikaci metabolitů. Zrychlení chromatografického běhu může zvýšit throughput v high-throughput laboratořích.

Závěr

Vyvinutá metoda LC/MS/MS poskytuje robustní, citlivý a reprodukovatelný postup pro simultánní kvantifikaci vitamínů D2 a D3 v mléčných produktech. Splňuje požadavky rutinních QC laboratoří a umožňuje spolehlivou kontrolu potravinové fortifikace.

Reference

• Gill A. et al. Analysis of Vitamin D2 and Vitamin D3 in Fortified Milk Powders and Infant and Nutritional Formulas by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry: Single Laboratory Validation, First Action 2016.05. Journal of AOAC International, 100(1), 2017.
• Agilent Technologies. Estimation of Fat-soluble Vitamins, Ergocalciferol, and Cholecalciferol in Edible Oil. Application Note 5991-8328EN, 2017.