Determination of Methylmalonic Acid in Serum, Plasma and Urine by LCMS-8030 using RECIPE ClinMass Complete Kit MS5000

Význam tématu

Měření methylmalonové kyseliny (MMA) slouží jako specifický ukazatel poruch metabolismu spojených s deficitem vitaminu B12 a dědičnými methylmalonovými acidemiemi.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a citlivou metodu pro kvantifikaci MMA v séru, plazmě a moči s minimální předsprací pomocí LC-MS/MS na zařízeních Shimadzu a komerčního kitu ClinMass® Complete Kit MS5000.

Použitá metodika

Pro přípravu vzorku bylo 100 µL biologického materiálu smícháno s 400 µL precipitantu obsahujícího deuterovaný interní standard. Po centrifugaci byl injektován 10 µL supernatantu.
Chromatografická separace proběhla gradientem od 20 % do 90 % organické fáze s návratem na počáteční podmínky v časech definovaných v programu.
Detekce probíhala v negativním režimu ESI s monitorováním MRM přechodů 117,1→73,2 a 117,1→55,2 pro MMA a 120,1→75,9 pro D3-MMA.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Nexera UHPLC
• Hmotnostní spektrometrie: Shimadzu LCMS-8030
• Ionizace: negativní ESI, MRM režim
• Parametry: desolvation line 275 °C, heat block 225 °C, nebulizér 3 L/min, sušící plyn 20 L/min, napětí -2,25 kV

Hlavní výsledky a diskuse

Rychlá chromatografická separace umožnila eluci MMA za méně než 2 minuty s ostrými píky.
Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu 26,1–177 µg/L s R2 = 0,9958.
Analýza dvou pacientských vzorků ukázala koncentrace MMA 26,7 a 65,7 µg/L s opakovatelností pod 5 % RSD.

Přínosy a praktické využití metody

Minimální předsprací zkracuje dobu přípravy a snižuje objem vzorku.
Vysoká citlivost a lineárnost zajišťují spolehlivou kvantifikaci v klinicky relevantním rozsahu.
Rychlý analytický cyklus podporuje vysokou propustnost v klinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace metody do plně automatizovaných laboratorních workflow.
Rozšíření panelu analyzovaných metabolit a multiplexní analýza.
Snížení objemu vzorku a další urychlení pomocí ultrarychlých chromatografických technik.

Závěr

Implementace ClinMass Complete Kit na LCMS-8030 s Nexera UHPLC nabízí rychlou, citlivou a přesnou kvantifikaci MMA.
Metoda je snadno zaveditelná v rutinní klinické diagnostice a výzkumu metabolických poruch.