Quantitation of Antiepileptics in Serum by UHPLC-Triple Quadrupole Mass Spectrometry

Význam tématu

Antiepileptika jsou klíčová pro kontrolu epileptických záchvatů a vyžadují přesné dávkování na základě sledování koncentrace v krvi. Přesná a rychlá analýza 26 různých antiepileptik v séru napomáhá optimalizovat léčbu, minimalizovat nežádoucí účinky a zlepšit klinickou péči.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout jednoduchou, spolehlivou a rychlou metodu pro simultánní kvantifikaci 26 antiepileptik v lidském séru. Použitý přístup kombinuje UHPLC se třetím kvadrupólem hmotnostního spektrometru a systém ClinMass TDM, což umožňuje efektivní terapeutický monitoring.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika využívá precipitaci proteinů a následné ředění:

• Vzorek: 50 µL séra.
• Precipitace: 100 µL činidla s izotopově značenými interními standardy, centrifugace (5 min, 10 000 × g).
• Ředění supernatantu 1:20 přidáním 950 µL dilučního roztoku.

Instrumentace:

• UHPLC: Bruker Elute UHPLC s kolonkou ClinMass TDM MS9030 a prefiltrem MS9032.
• MS/MS: EVOQ LC-TQ Elite s VIP H-ESI iontovým zdrojem (pozitivní/negativní režim).
• Chromatografický gradient: 0–4,5 min s přechodem mobilní fáze B od 0 % do 80 % a zpět.
• MRM přechody pro 26 analytů s rychlým přepínáním polarity.

Hlavní výsledky a diskuse

• Analýza 26 antiepileptik v jedné dávce trvá 4,5 minuty.
• Lineární rozsah kalibračních křivek 0,020–119 mg/L, koeficienty determinace R² 0,9931–1,0000.
• Přesnost: relativní standardní odchylka (RSD) < 9 % u většiny analytů.
• Akurátnost: bias v rámci ± 10 % pro většinu látek (max. 13,5 %).
• Simultánní detekce v ESI+ a ESI– režimu zvyšuje flexibilitu metody.

Přínosy a praktické využití metody

• Nízký objem vzorku (50 µL) a jednoduchá příprava zkracují čas a náklady na analýzu.
• Vysoká průchodnost až desítek vzorků za den vhodná pro rutinní klinické laboratoře.
• Vysoká specifita a citlivost zajišťují spolehlivé terapeutické dávkování.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody o nové lékové třídy a metabolity pro komplexnější monitoring.
• Automatizace přípravy vzorků a datové analýzy pro zvýšení efektivity.
• Adaptace protokolu na další biologické matice (moč, cerebrospinální mok).
• Integrace do integrovaných TDM platforem a klinických informačních systémů.

Závěr

Vyvinutá UHPLC–MS/MS metoda kombinuje rychlý průběh měření, nízké nároky na vzorek a vynikající analytické parametry. Poskytuje robustní a opakovatelný nástroj pro terapeutický monitoring antiepileptik v séru, který může zlepšit personalizaci léčby pacientů s epilepsií.