Analysis of Methylmalonic Acid in Serum Using the Xevo TQ-S micro for Clinical Research

Význam tématu

Methylmalonová kyselina (MMA) je klíčovým biomarkerem nedostatku vitaminu B12 ve výzkumu a klinických studiích. Zvýšené hladiny MMA indikují oslabenou aktivitu methyl-malonyl-CoA mutázy a slouží jako citlivý ukazatel statusu vitaminu B12.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout spolehlivou, vysoce citlivou a selektivní LC-MS/MS metodiku pro kvantifikaci MMA v lidském séru s minimálním objemem vzorku (100 µL) a vysokým průtokem analýz s jednoduchou přípravou vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky: 100 µL séra s přidáním vnitřního standardu (MMA-13C4) a formiátu acetonitrilu.
• Příprava: proteinová precipitace a odstraňování fosfolipidů pomocí destiček Ostro™ Phospholipid Removal Plate.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC I-Class s CSH C18 kolonkou (2.1×100 mm, 1.7 µm), gradient 3,3 min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 10 µL.
• Detekce: Xevo™ TQ-S micro Tandemový kvadrupólový hmotnostní spektrometr v režimu MRM, přechody 117.1>73.1 pro MMA a 121.1>76.1 pro vnitřní standard.

Hlavní výsledky a diskuse

• Selektivita: čisté oddělení MMA od izobarů a isomerů (např. sukcinátu) bez významných interferencí.
• Senzitivita: LLOQ 21 nmol/L (S/N > 10), přesnost měření RSD < 20 %.
• Precision: celková přesnost QC v plazmě 4–6 % RSD, opakovatelnost 3–5 % RSD.
• Linearita: analytický rozsah 6,8–1524 nmol/L, koeficient determinace r2 > 0,995.
• Matrix effect: interní standard účinně kompenzuje vlivy matrice, normovaný faktor RSD < 5 %.
• Stabilita: extrahované vzorky stabilní až 67 h při 8 °C (odchylka < 2 %).
• Metoda srovnání: Demingova regrese (y = 1,05x – 11,77), Bland-Altman rozdíl –0,8 %, žádný významný systematický bias.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální objem vzorku (100 µL) a vysoká propustnost díky přípravě na destičkách.
• Vysoká citlivost a přesnost vhodné pro klinický výzkum a QA/QC laboratoře.
• Jednoduché workflow podporující práci v multi-well formátu a automatizaci.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na multiplexní stanovení dalších metabolit souvisejících s vitaminem B12.
• Integrace do plně automatizovaných platforem pro rutinní diagnostiku a výzkum.
• Využití ve velkých longitudinálních studiích a klinických zkouškách s vysokým počtem vzorků.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda spojuje selektivní chromatografii na ACQUITY UPLC I-Class, citlivou detekci na Xevo TQ-S micro a efektivní přípravu vzorků pomocí Ostro destiček. Umožňuje přesnou, opakovatelnou a robustní kvantifikaci methylmalonové kyseliny v séru, ideální pro náročný klinický výzkum.

Reference