High-Speed, High-Sensitivity Analysis of Drugs in Plasma Using Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8040)

Význam tématu

Pulmonální arteriální hypertenze (PAH) je závažné onemocnění charakterizované zvýšeným tlakem v plicním oběhu a poškozením pravé srdeční komory. Rychlá a citlivá stanovení terapeutických látek v plazmě jsou klíčová pro farmakokinetické studie, sledování léčby a vývoj nových léčiv.

Cíle a přehled studie / článku

Účelem studie bylo ukázat možnosti vysoce citlivé a rychlé analýzy čtyř látek používaných při léčbě PAH (bosentan, ambrisentan, sildenafil, tadalafil) v lidské plazmě metodou LC/MS/MS v pozitivním ESI módu na přístroji Shimadzu LCMS-8040.

Použitá instrumentace

• Kapalinový chromatograf: Shimadzu LC-20AD XR
• Hmotnostní spektrometrie: Shimadzu Triple Quadrupole LCMS-8040
• Kolona: Cadenza CD-C18 (75×2 mm, 3 μm) s ochrannou kolonou Phenomenex Security Guard

Použitá metodika

Vzorek: 50 μl lidské plazmy doplněné interními standardy (bosentan-d4, ambrisentan-d3, sildenafil-d3, tadalafil-d3).
Extrakce pomocí kazety Oasis WAX (30 mg/1 ml):

• Kondicionování: 1 ml metanol, 1 ml vody
• Aplikace vzorku
• Oplach: 1 ml 2 % kyseliny mravenčí
• Eluce: 1 ml metanol
• Sušení dusíkem, rekonstituce v 50 μl mobilní fáze

Chromatografie:

• Mobilní fáze: acetonitril/5 mM octan amonný (45:55 v/v), pH 5,0
• Průtok: 0,2 ml/min, teplota kolony 40 °C, injekce 20 μl

MS/MS podmínky:

• ESI pozitivní režim, napětí 4,5 kV, teplota trysky 400 °C
• MRM přechody pro každou substanci a její deuterovaný IS

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatografické oddělení čtyř látek proběhlo do 5 minut (ambrisentan 1,8 min; tadalafil 2,5 min; sildenafil 3,4 min; bosentan 3,9 min). Extrakční výtěžky se pohybovaly mezi 44,3–109,9 % s koeficientem variability <17,7 %. Citlivost metody umožnila detekci nízkých ng/ml koncentrací s dobrou přesností a přesností.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda vyžaduje pouze malé množství biologického materiálu, minimalizuje čas přípravy a dosahuje vysoké propustnosti vzorků. Je vhodná pro farmakokinetické studie, monitorování léčby a výzkum farmakokinetických interakcí.

Budoucí trendy a možnosti využití

V následujícím vývoji lze očekávat:

• Další miniaturizaci a multiplexní assay metod
• Automatizaci přípravy vzorků a integraci on-line SPE
• Využití vysoce výkonných hmotnostních analyzátorů pro širší spektrum analytů
• Rozvoj bioanalytických metod pro biomarkery a metabolity

Závěr

Vysoce citlivá a rychlá metoda LC/MS/MS pro stanovení bosentanu, ambrisentanu, sildenafilu a tadalafilu v lidské plazmě splňuje požadavky farmakokinetických studií. Jednoduchá příprava vzorku a krátká doba analýzy umožňují efektivní workflow ve výzkumných i komerčních laboratořích.

Reference

1. Y. Yokoyama et al. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 89 (2014) 227–232