Lessons from COVID-19: Verifying Performance of an HPLC-UV Method with MS-Compatible Conditions for Chloroquine Phosphate Analysis

Význam tématu

Chloroquine fosfát je dlouhodobě využíván jako účinné antimalarikum a jeho analýza je nezbytná pro zajištění kvality farmaceutických přípravků. V kontextu pandemie COVID-19 se zvýšil zájem o rychlé a hmotnostně spektrometricky kompatibilní metody, které umožňují detailní charakterizaci účinné látky a jejího možného rozkladu či nečistot.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této aplikace bylo vyvinout a ověřit krátkou HPLC-UV metodu s kompatibilním mobilním pufrem pro MS detekci chloroquine fosfátu, splňující požadavky USP monografie, a porovnat ji se standardní USP metodou z hlediska rozlišení, stackingu píku a celkové doby analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Nová metoda pracuje na reverzní chromatografické kolonce s ranými gradienty a mobilní fází kompatibilní s hmotnostní spektrometrií. Analýza probíhá při vlnové délce 224 nm pro UV detekci a využívá mass detector pro potvrzení identity látek bez potřeby samostatných standardů.

Použitá instrumentace

• ACQUITY Arc HPLC systém
• ACQUITY UPLC PDA detektor (UV 224 nm)
• ACQUITY QDa hmotnostní detektor

Hlavní výsledky a diskuse

Nová metoda dosahuje výrazně vyššího rozlišení mezi píky chloroquine a amodiaquine a snižuje tailing efekt. Doba analýzy byla zkrácena z 7 minut (USP metoda) na 3 minuty. Relativní standardní odchylky ploch a retenčních časů u pěti opakování nepřesáhly 0,4 %. Mass detekce umožnila spolehlivou a rychlou identifikaci píků bez nutnosti referenčních standardů.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zrychlení analýzy podporuje vysokoprůtokové laboratoře a časově citlivé výrobní procesy.
• Kompatibilita s hmotnostní spektrometrií umožňuje kvalitativní stanovení neznámých komponent a degradantů.
• Zlepšené chromatografické parametry zajišťují vyšší spolehlivost a reprodukovatelnost QC vyšetření.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze aplikovat i na další malomolekulární APIs vyžadující rychlou kontrolu kvality. V budoucnu je plánována integrace vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro detailní impuritní profilování a online monitoring výrobních linií.

Závěr

Navržená MS-kompatibilní HPLC-UV metoda pro chloroquine fosfát poskytuje rychlejší a přesnější alternativu k USP monografii. Díky zkrácené době analýzy, lepšímu rozlišení a možnosti potvrzení identity píků QDa detektorem představuje cenný nástroj pro farmaceutickou analytiku a kontrolu kvality.

Reference

1. Al-Bari MA. Targeting Endosomal Acidification by Chloroquine Analogs as a Promising Strategy for the Treatment of Emerging Viral Diseases. Pharmacol Res Perspect. 5(1):e00293 (2017).
2. Zhong Jixin et al. The Immunology of COVID-19: is Immune Modulation an Option for Treatment? Lancet Rheumatol. 2020 May 20.
3. Kupferschmidt K. Big Studies Dim Hopes for Hydroxychloroquine. Science. 368(6496):1166–1167 (2020).
4. Dryden J. Global Study to Test Malaria Drug to Protect Health Workers from COVID-19: COVID-19 Therapeutics Accelerator to Fund International Trial of Chloroquine. 2020.
5. Tropmedres.ac. Mahidol University. COVID-19 COPCOV trial. 2020.
6. USP Monograph. Chloroquine Phosphate Tablets, USP42-NF37. The United States Pharmacopeia Convention.