Application of HPLC in Quality Analysis of Hydroxychloroquine Sulfate

Význam tématu

Hydroxychlorochin sulfát je celosvětově registrované antimalarikum s imunosupresivními a imunomodulačními účinky, které se uplatňuje při léčbě autoimunitních onemocnění. V souvislosti s pandemií COVID-19 byl znovu zkoumán jako potenciální antivirotikum. Kvalitativní a kvantitativní analýza hydroxychlorochin sulfátu v surovinách a tabletách je klíčová pro zajištění bezpečnosti a účinnosti léčby a pro spolehlivé výsledky klinických studií.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo implementovat a ověřit metody dle evropské (EP 10.0) a americké (USP 43) farmakopei pro stanovení hydroxychlorochin sulfátu a jeho příbuzných nečistot v surovině, a dále kvantifikovat obsah účinné látky v tabletách. Metody byly provedeny na chromatografických systémech Shimadzu UHPLC a HPLC s důrazem na dosažení požadovaných rozlišení a reprodukovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Pro EP analýzu:

• Systém: Shimadzu UHPLC LC-30A
• Kolona: C18, 50×2,1 mm, 1,7 μm
• Mobilní fáze: gradient metanol/bufrát (10:90 → 85:15)
• Průtok: 0,7 mL/min, objem injekce 4 μL, detekce 254 nm, 40 °C

Pro USP analýzu:

• Systém: Shimadzu HPLC LC-2040C 3D
• Kolona: Shim-pack GIST C18, 250×4,6 mm, 5 μm
• Mobilní fáze: voda/MeOH/ACN/HOPO₄/surfaktant (800/100/100/2 mL + Na-pentansulfonát)
• Průtok: 1,0 mL/min, objem injekce 20 μL, isokratická eluce, 40 °C

Pro kvantitativní stanovení byly vzorky dle monografií EP 10.0 a USP 43 přístupně extrahovány a ředěny do definovaných koncentrací.

Hlavní výsledky a diskuse

EP metoda dosáhla rozlišení >3,0 mezi hydroxychlorochin sulfátem a nečistotou C a také mezi nečistotami B a C, což splňuje požadavky EP. USP metoda vykázala rozlišení mezi hydroxychlorochin sulfátem a chlorochin fosfátem R=3,728 (>1,8) a vysokou reprodukovatelnost (RSD area =0,03 %, n=5). Obsah hydroxychlorochin sulfátu v komerčních tabletách se pohyboval kolem 99,99 % deklarované hodnoty, což odpovídá kritériím USP (93–107 %).

Přínosy a praktické využití metody

Ověřené HPLC/UHPLC postupy poskytují spolehlivou, rychlou a přesnou kontrolu kvality suroviny i finální formy léku. Umožňují sledovat přítomnost a množství příbuzných nečistot a zajišťují shodu s farmakopejními limity, což je nezbytné pro farmaceutickou výrobu a validaci procesů QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj metod bude směřovat k vyšší automatizaci, integraci on-line vzorkovačů a rychlejších UHPLC analýz s menší spotřebou rozpouštědel. Další rozšíření představuje spojení s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci neznámých nečistot a využití v procesní analýze (PAT) pro kontinuální monitorování výroby.

Závěr

Navržené a ověřené metody dle EP10.0 a USP43 na systémech Shimadzu ukazují výborné rozlišení, reprodukovatelnost a přesnost kvantifikace hydroxychlorochin sulfátu a jeho nečistot. Postupy plně vyhovují farmakopejním požadavkům a lze je aplikovat v rutinní kontrole kvality farmaceutických výrobků.

Reference

• European Pharmacopoeia 10.0
• United States Pharmacopeia 43
• Shimadzu Application Note LC-199, 2020