High-Speed Analysis of Voriconazole in Plasma Using Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8050)

Význam tématu

Analýza vorikonazolu v krevní plazmě je klíčová pro monitorování léčby a farmakokinetické studie u pacientů s plísňovými infekcemi. Rychlé, citlivé a přesné stanovení koncentrace tohoto triazolového antifungálního léku přispívá ke správnému dávkování a minimalizaci nežádoucích účinků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout zkrácenou a jednoduchou metodu pro kvantifikaci vorikonazolu v lidské plazmě s využitím vysokorychlostního LC/MS/MS (LCMS-8050). Klíčové bylo zjednodušení předúpravy vzorků a zachování vysoké přesnosti a opakovatelnosti měření.

Použitá metodika

Vzorky lidské plazmy (50 µl) byly očištěny jednoduchou deproteinizační metodou: přidání izotopově značeného interního standardu (vorikonazol-d3, 1 µg/ml) a acetonitrilu, promíchání (vortex), odstředění (14 000 rpm, 4 °C, 5 min) a analýza 1 µl supernatantu.

Použitá instrumentace

• HPLC: Shimadzu Nexera X2
• Kolona: Shim-pack GIS (75 × 2,1 mm, 3 µm)
• Mobilní fáze: A) 10 mmol/l acetát amonný ve vodě, B) methanol; gradient 30→100→30 % B v čase 0–0,5–3,0–5,0 min, průtok 0,4 ml/min, 40 °C
• MS: Shimadzu LCMS-8050, ESI pozitivní ionizace, MRM
• MRM přechody: vorikonazol 350,20→281,20; vorikonazol-d3 353,20→284,20

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka pro oblast 0,1–10 µg/ml vykázala výtečnou linearitu (r ≥ 0,999). U standardů byla opakovatelnost ≤ 5 % a přesnost v rozmezí 93–106 %. U QC vzorků (0,2; 4; 8 µg/ml) dosáhla opakovatelnost ≤ 2 % a přesnost 95–104 %. Chromatografické špičky vorikonazolu se elučně objevily přibližně v 2,5 min, bez rušivých interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza (< 5 min na vzorek), vysoká propustnost
• Jednoduchá předúprava vzorků bez SPE
• Vysoká citlivost a selektivita díky MRM
• Vhodné pro klinické farmakokinetické studie, terapeutické monitorování a QA/QC v bioanalýze

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávají se další zrychlení analýzy nasazením UHPLC, automatizace vzorkové přípravy a využití vysoce rozlišených hmotnostních spektrometrů. Dále je perspektivní rozšíření metody na současné multiplexní stanovení různých antifungálních sloučenin.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda s minimální předúpravou umožňuje spolehlivou, přesnou a rychlou kvantifikaci vorikonazolu v plazmě. Je ideální pro vysokopropustné nastavení v biomedicínském a farmaceutickém výzkumu.

Reference

• Application News No. C125, Shimadzu Corporation, First Edition May 2016
• Spolupráce: Pharmaceutical Sciences Department, Tohoku University Hospital