Analysis of Human IgG Glycans on a Solid Core Amide HILIC Stationary Phase

Význam tématu

Glykanová analýza hraje klíčovou roli v porozumění strukturálních a funkčních vlastností glykoproteinů, zejména lidských IgG. Odlišné větvení a modifikace glykanů ovlivňují imunitní odpověď a slouží jako biomarkery onemocnění. Efektivní separace izomerů je nezbytná pro detailní charakterizaci a kontrolu kvality bioterapeutik.

Cíle a přehled studie / článku

Tato studie demonstruje chromatografickou separaci 2-aminobenzamid (2AB) značených lidských IgG glykanů pomocí amide-HILIC fáze na pevném jádře (Accucore 150-Amide-HILIC). Cílem je dosáhnout vysoké účinnosti separace při tlacích kompatibilních s konvenčními HPLC systémy.

Použitá instrumentace

• HPLC systém: Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 RSLC
• Detektor: Fluorescenční detektor (FLD), ex 330 nm / em 420 nm
• Kolona: Accucore 150-Amide-HILIC, 2.6 µm, 100 × 2.1 mm
• Mobilní fáze A: acetonitril
• Mobilní fáze B: 50 mM amonium formiát, pH 4.4
• Gradient: 20–40 % B (0–26 min), 40–50 % B (26–27 min)
• Průtok: 1 mL/min; teplota kolony: 60 °C; tlak ~300 bar
• Injekční objem: 5 µL; mycí rozpouštědlo: acetonitril/voda (78:22)
• Software: Thermo Scientific Chromeleon 7

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila rozlišení sedmi strukturálních forem IgG glykanů s výborným tvarem píků a symetrií. Identifikované komponenty:

1. FA2
2. FA2B
3. FA2G1 (větév 6)
4. FA2G1 (větév 3)
5. FA2G2
6. FA2G2S1
7. FA2G2S2

Solid-core technologie přispěla ke snížení backpressure a zachování vysoké účinnosti za provozního tlaku kompatibilního s běžnými HPLC přístroji.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a robustní analýza glycans v bioterapeutikách
• Vhodné pro kontrolu kvality a výzkum glykomiky
• Možnost rozšíření na další hydrosolubilní biomolekuly

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace HILIC s hmotnostní spektrometrií pro detailní strukturální analýzu
• Vývoj vysokopropustných metod pro bioprofilování v klinické praxi
• Pokročilé fázové chemie a nano-HILIC pro separaci izomerů
• Automatizace glykoanalytických workflow
• Personalizovaná medicína založená na glykanových profilech

Závěr

Metoda použitá na Accucore 150-Amide-HILIC kolóně prokázala efektivní, reprodukovatelnou a tlakově přijatelnou separaci 2AB značených lidských IgG glykanů, což umožňuje detailní charakterizaci a podporuje aplikace v biopharma výzkumu a kontrole kvality.

Reference

1. Thermo Scientific. GlycanPac AXH-1 Product Specification